ELISA za virusni hepatitis

9. ožujka 2017., 16:25 Stručni članci: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3.608

Da bi se otkrio virusni hepatitis u tijelu, lijek široko koristi imunološki test enzima koji se temelji na detekciji koncentracije i tipa antigena pomoću antitijela i enzima. Provodi se u fazama, laboratorijskim istraživanjima, s velikom točnošću indikacija. Ovisno o količini i klasi antitijela, boji i koncentraciji enzima koji koristi ELISA i, shodno tome, liječnik dijagnosticira bolest, promjene.

Što je ELISA?

Prisutnost virusnog hepatitisa u tijelu pacijenta određuje serološkom metodom analize krvi za prisutnost HCV virusa i markera (tijela i antitijela) koji to ukazuju. Enzimski imunosorbentni test (ELISA) ispituje različite viruse, spojeve niske molekularne mase, makromolekule, njihove kvalitativne i kvantitativne pokazatelje, koristeći manifestaciju reakcije na njihove antigene. Da biste to učinili, upotrijebite enzim kao oznaku za registraciju signala. Sve se češće koristi u medicini, jer ELISA jasno pronalazi dobro definirane antigene, ne miješajući ih s drugima, ima visoku osjetljivost na prisutnost invazije u virusnom hepatitisu.

Nedostatak takve dijagnoze je nemogućnost identificiranja uzroka bolesti, jer metoda samo ukazuje na reakciju imunološkog sustava u tijelu. Na rezultate analize utjecalo je ranije cijepljenje. 8 sati prije analize preporuča se suzdržavanje od jedenja, nikotina, alkohola. Osnova ELISA testa je enzimski i imuni odgovor organizma na virus. Biološke molekule se vežu za stanicu i njene elemente, mikroorganizme, detektiraju virus, a zatim djeluju enzimi koji vam omogućuju da izrazite imuni odgovor vidljivim i mjerljivim parametrom.

Indikacije za analizu

Virusni hepatitis u tijelu može uzrokovati rak i cirozu jetre. Važnost pravodobne dijagnoze je neosporna. Primarna metoda dijagnostike je ELISA test, koji s velikom točnošću određuje prisutnost HCV virusa (IgM i IgG) i aktivnost njegovih elemenata u tragovima. Obvezni testovi za prolazak virusnog hepatitisa:

  1. Osobe s rizičnim skupinama (ovisnici o drogama, osobe oboljele od AIDS-a, zaposlenici u zdravstvenim ustanovama i ustanovama za provedbu zakona).
  2. Osobe s akutnim ili kroničnim hepatitisom.
  3. Trudnice i žene koje planiraju trudnoću.

ELISA prepoznaje bolest u bilo kojoj fazi. Rezultati analize u prosjeku su spremni za 2 dana.

Kriteriji koji određuju važnost analize

ELISA test određuje prisutnost protutijela klase IgG, IgM, IgA. Kod dijagnosticiranja virusnog hepatitisa, liječnik ne obraća pažnju na njihov tip, budući da prisutnost bilo koje takve manifestacije HCV virusa već ukazuje na akutni ili kronični stadij bolesti. U ranim stadijima bolesti, razina IgM-a raste (5 dana nakon infekcije); na 15. - 20. dan pojavljuju se IgG antitijela i mogu ostati u ljudskoj krvi dugo vremena čak i nakon izlječenja; IgA se pojavljuje nakon 10-14 dana, smanjuje se nakon tretmana.

Ako se IgG i IgA otkriju nakon primjene lijekova i njihova razina ostaje na istoj stopi - nosilac ima kronični oblik hepatitisa. Važan kriterij testa bit će jasna definicija klase dostupnih antitijela i njihove količine. Na temelju toga možete znati ne samo o prisutnosti bolesti, već io stupnju njezina razvoja. Otkrivanje takvih elemenata u krvi pacijenta omogućuje propisivanje pravilnog i pravovremenog liječenja kako bi se spriječile ozbiljnije posljedice.

Kako se to radi?

Dodijelite izravni, a ne izravni ELISA test. Izravni stupnjevi:

  1. Skupljajući biološki materijal i stavljajući ga u posebne rupe.
  2. Unutar 15-30 minuta antigeni su vezani na površinu jažica.
  3. Dodavanje antitijela u jažice na pronađeni antigen. Sve je ostalo na 1-5 sati.
  4. Uklonite nevezane antigene (sipajte sadržaj jažica).
  5. Isperite jažice posebnom otopinom.
  6. Dodajte otopinu enzima u jažice. Ostavite 30 minuta - 1 sat.
  7. Korištenje kolorimetrije (detekcija boje i koncentracije boje sadržaja u bušotini, usporedba s pokazateljima koji su izravno proporcionalni koncentraciji virusa).
Upotreba za dijagnozu neizravne ELISA-e daje točniji rezultat.

Indirektna ELISA metoda provodi se uporabom neobilježenih antitijela za pronađene antigene i naknadnim dodavanjem obilježenih antitijela. Prvo, krv se uzima od pacijenta i širi se kroz bunare 15-30 minuta. (antitijela su fiksirana s rupama). Tada se u njih unose neoznačena antitijela 1 do 5 sati (formira se veza antigena s antigenima - imunološki kompleks). Zatim se iz jažica izlije nevezani mikroelementi i ispere posebnom otopinom. U sljedećoj fazi laboratorijski tehničar dodaje obilježene elemente u tragove u jažice 15-30 minuta. (ovo se veže neoznačeno s obilježenim s formiranjem kompleksa "antitijelo-antitijelo-antigen"). Ekstra (labavo) se ponovno uklanja tijekom pražnjenja i pranja otopinom. Sljedeći je enzim koji mijenja boju za 5-30 minuta. ostaci u rupama i podaci o boji uspoređeni su s podacima pokazatelja tablice. Indirektna ELISA je točnija.

Što pokazuje ELISA za virusni hepatitis?

ELISA omogućuje otkrivanje prisutnosti infekcije (virusi hepatitisa svih vrsta, HIV, herpes, sifilis, citomegalovirus, ospice, rubeola, virus mumpsa, Epstein-Barr virus), je marker autoimunih bolesti, stanica raka. Ukazuje na kršenje reproduktivnih funkcija (promjene u testosteronu, prolaktinu, estradiolu i progesteronu), nefunkcioniranju štitnjače, infestaciji helmintima, klamidiji. Učinkovit za otkrivanje ureaplasmoze, hripavca, virusa Dange, virusa Zapadnog Nila, Borrelia. Popis definicija je visok, uključuje mnoge stavke.

Potvrda rezultata

Određivanje antigena HCV virusa ELISA-om daje točnost od 98%. Također se koristi za ponovno ispitivanje biološkog materijala s neizrazitim prethodnim pokazateljima. Prisutnost IgM antigena nije pokazatelj akutnog hepatitisa i zahtijeva dodatna istraživanja. Kada se ELISA test ponovi, rezultati se podudaraju za 90-100%. U slučaju minimalnog odstupanja, kao indikator uzima se prosječna vrijednost. Za maksimalnu točnost u smislu liječnika savjetuju paralelno s provođenjem biokemijske analize krvi. Za testiranje rezultata nakon enzimskog imunološkog testa možete koristiti druge dijagnostičke metode.

Istraživanje virusnog hepatitisa metodom ife

ELISA u dijagnostici virusnog hepatitisa. Mogućnosti enzimskih imunotestova

Specifična laboratorijska dijagnostika virusnog hepatitisa temelji se na primjeni imunokemijskih i molekularno-bioloških metoda istraživanja. Glavne imunokemijske metode su radioizotop ili radioimunska (RIA) i imunoanaliza (ELISA). Imunokemijske dijagnostičke metode temelje se na specifičnoj interakciji antigena - antitijela s naknadnom identifikacijom kompleksa uz pomoć posebnih oznaka. Najčešći imunološki test enzima.

Prva su izvješća o uporabi enzimskog imunotestova. kao metoda za određivanje tvari objavljene su 1971. godine istovremeno dvije istraživačke skupine - V. Van Weemen, A. Schuurs i E. Engvall, P. Perlmann. Enzimski imunološki test temelji se na sljedećem principu: na krutoj fazi, koja uglavnom koristi površinu jažica polistirenske tablete, fiksiran je antigen infektivnog agensa ili antitijela (često mješavina antitijela) s antigenima. Taj antigen ili antitijela, koja su fiksirana na krutoj fazi, nazivaju se imunosorbenti.

Kao rezultat inkubacije imunosorbenta i test seruma u prisutnosti detektabilnog agensa, oni su vezani za kompleks antigen - antitijelo. Nakon postupka pranja, tijekom kojeg se uklanjaju nevezani antigeni i antitijela, provodi se inkubacija s konjugatom. Kao konjugat za detekciju HBsAg, koriste se anti-HBs, u otkrivanju antitijela na virus hepatitisa C - antitijela na humane imunoglobuline (antivirusni konjugat) obilježeni peroksidazom iz hrena. Kao rezultat ove inkubacije dolazi do vezanja na već postojeće antigenske komplekse - antitijelo dodatno uvedenog konjugata. Nakon uklanjanja nevezanog konjugata (ispiranje), supstrat se uvodi u jažice. Kada se koristi konjugat peroksidaze, vodikov peroksid se koristi kao supstrat u kombinaciji s indikatorom, koji se najčešće koristi kao ortofenilendiamin (OPD) ili tetrametilbenzidin (TMB). Rezultat se procjenjuje fotometrijski.

Kvaliteta i pouzdanost analitičkih sposobnosti enzimske imunotestove karakterizira niz kriterija koji uključuju osjetljivost, specifičnost, točnost i obnovljivost.

Osjetljivost je minimalna količina tvari koja se može otkriti imunoanalizom enzima. U ovom slučaju, donja granica osjetljivosti ove metode je koncentracija ispitivane tvari u uzorku, koja odgovara najmanjoj pozitivnoj vrijednosti određivanja, koja je statistički značajno različita od pokazatelja namjerno negativnih uzoraka. Osjetljivost IFTS-a ovisi o brojnim okolnostima koje se odnose i na dizajn testnog sustava (afinitet imunosorbenta, kvalitetu ekstrakcijskog i pufernog sustava), te na razlučivost i točnost metode registracije.

Specifičnost - sposobnost da se točno identificiraju komponente za određivanje kojih je ovaj enzimski imunološki test namijenjen. Specifičnost ELISA određuje se u velikoj mjeri unakrsnom reakcijom antitijela ili antigena (tj. Sastav koji se koristi kao imunosorbent) s blisko povezanim spojevima, kao i sastav inkubacijskog medija (efekt matrice).

Točnost - podudarnost prosječne vrijednosti rezultata ponovljenih određivanja istog kontrolnog uzorka s pravom vrijednošću izmjerenog parametra. Točnost određivanja u ELISA-u ovisi o kvaliteti testnog sustava i kontrolnog uzorka. Za dobre imunološke testne sustave, pokazatelji ispravnosti su u rasponu od 90-110%. Posebnost biomedicinskih istraživanja u ELISA-i je nemogućnost utvrđivanja točne vrijednosti, pa se kao prava vrijednost uzima prosjek nekoliko stručnih laboratorija. Statistički kriterij za točnost je aritmetički prosjek i stupanj njegovog odstupanja od stvarne vrijednosti, izražen kao postotak.

Ponovljivost - sposobnost testnog sustava da pokaže iste vrijednosti s ponovljenim ispitivanjima istog uzorka. Reproduktivnost ovisi o nasumičnim pogreškama (pogreškama) tijekom postupka postavljanja reakcije, te o kvaliteti ispitnih sustava i točnosti metode bilježenja rezultata. Vjeruje se da reproduktivnost istih kontrolnih uzoraka iste tvrtke u različitim laboratorijima ne smije prelaziti vrijednost koeficijenta varijacije od 15%.

Postoji nekoliko specifičnih ELISA shema za određivanje markera virusnog hepatitisa: a) imunoanaliza direktnog enzima; b) indirektni enzimski imunotest; c) kompetitivnu inhibiciju; c) metodu “zamke” ili “hvatanje”.

Od molekularno bioloških metoda za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa, češće se koriste polimeraza lančana reakcija i hibridizacija. Ove metode, posebice PCR, omogućuju otkrivanje vrlo malih količina specifične virusne DNA ili RNA i, stoga, procjenu replikacije, au nekim slučajevima i replikacijske aktivnosti.

Test krvi na hepatitis C

Hepatitis C je jedna od najčešćih bolesti jetre koja se javlja kada je zaražena virusom hepatitisa C (HCV), koji ulazi u tijelo prije svega kada dođe u kontakt s krvlju zaražene osobe. Nalazi se kod kroničnog i akutnog hepatitisa C. U 70-80 posto bolesnika s akutnim hepatitisom C nema simptoma bolesti, samo u nekim slučajevima, nakon nekog vremena nakon infekcije, javljaju se manifestacije bolesti koje se izražavaju umorom, bolovima u trbuhu, gubitkom apetita, zamračenjem. mokraća, povraćanje, mučnina, munjeviti izmet, žutica, bol u zglobovima. U pravilu, simptomi se javljaju 6-7 tjedana nakon infekcije, ali trajanje pojave znakova bolesti varira od 2 tjedna do 6 mjeseci. Ako se gore navedeni simptomi pojave, trebate konzultirati liječnika za zarazne bolesti i napraviti test krvi za hepatitis C. Dijagnoza hepatitisa, provedena na vrijeme, može otkriti bolest u ranim fazama i značajno povećati šanse za oporavak.

Kada je zakazan test na hepatitis C

Situacije kada je potreban test na hepatitis C:

  • tijekom trudnoće i planiranja obitelji;
  • bolesnika sa simptomima kroničnog ili akutnog hepatitisa;
  • osoba je u opasnosti. To su medicinski radnici, osobe u zatvoru, policijski službenici, ljudi koji koriste droge, imaju veliki broj seksualnih partnera, imaju AIDS, nalaze se na hemodijalizi i drugi.

Priprema za analizu hepatitisa C

Posebna priprema za analizu hepatitisa C nije potrebna. Za analizu, krv se uzima iz vene na prazan želudac, a istovremeno treba proći najmanje osam sati nakon posljednjeg obroka.

Testovi hepatitisa C ELISA

Prva analiza, obično propisana za dijagnozu hepatitisa C - ELISA test (enzimski imunosorbentni test). Testovi hepatitisa C ELISA omogućuju otkrivanje prisutnosti antitijela na virus hepatitisa C (anti-HCVAb) u krvi. Ako je rezultat ELISA testa pozitivan, to ukazuje na prisutnost kontakta tijela s virusom hepatitisa C. Ali 40% osoba koje imaju pozitivan ELISA test ne detektira virus u krvi. Ovaj fenomen naziva se lažno pozitivnim rezultatom. Također, uz pomoć ELISA-e, provjeri se donorska krv.

RIBA za hepatitis C

RIBA analiza za hepatitis C koristi se za potvrdu pozitivnog ELISA rezultata. Metoda rekombinantnog imunoblotinga (RIBA) je točnija studija prisutnosti antitijela na virus hepatitisa C. Prisutnost virusa hepatitisa C u tijelu također ne određuje pozitivan rezultat, već samo potvrđuje prisutnost antitijela.

Testovi hepatitisa C PCR

Kako bi se otkrila prisutnost virusa hepatitisa C u krvi (HCV RNA) i postavila dijagnoza, najčešće se rabi analiza metodom lančane reakcije polimeraze (PCR). Ova studija omogućuje da se s velikom točnošću otkriju prisutnost u krvi čak i male količine virusa. PCR analiza za hepatitis C može otkriti prisutnost virusa već 5 dana nakon infekcije, mnogo prije pojave antitijela. Kada je rezultat PCR analize pozitivan, to znači prisutnost aktivne infekcije.

Postoje takve varijacije PCR analize:

  • kvantitativni PCR, koji omogućuje utvrđivanje ne samo činjenice prisutnosti virusa, već i virusnog opterećenja (količine virusa). Ovaj pokazatelj je od velike važnosti za određivanje učinkovitosti liječenja;
  • genotipizacija kojom se utvrđuje genotip virusa hepatitisa C, što je važno za određivanje trajanja i taktike liječenja. Postoji više od 10 genotipova virusa hepatitisa C, ali za kliničku praksu dovoljno je definirati pet najčešćih tipova: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Provedena je kvantitativna PCR analiza:

  • s kvalitativnim pozitivnim testom na prisutnost RNA virusa hepatitisa C u serumu;
  • za točnu procjenu učinkovitosti liječenja;
  • odrediti taktiku liječenja pacijenta.

Ne postoji izravna veza između težine hepatitisa C i količine virusa u krvi. Koncentracija virusa utječe na infektivnost bolesti, to jest, što je veća količina virusa u krvi pacijenta, to je veći rizik od prijenosa virusa, na primjer, putem seksualnog kontakta ili s majke na dijete. Također, učinkovitost liječenja ovisi o koncentraciji virusa. Tijekom terapije povoljan faktor je nisko virusno opterećenje, a vrlo visoka je nepovoljna.

Urađena je analiza genotipova:

  • s kvalitativnim pozitivnim testom na prisutnost RNA virusa hepatitisa C u serumu;
  • za točnu procjenu učinkovitosti liječenja;
  • odrediti taktiku liječenja pacijenta;
  • predvidjeti kroničnost infektivnog procesa;
  • odrediti progresiju bolesti.

Otkrivanje genotipa virusa je od velike važnosti za određivanje trajanja liječenja, što je važno, budući da interferon ima širok raspon nuspojava i nisku toleranciju za pacijenta.

Analiza dekodiranja hepatitisa C

Normalno, virusna RNA, antitijela na njih i antigeni su potpuno odsutni. Prisutnost protutijela u krvi ukazuje na prisutnost kroničnog ili akutnog hepatitisa C ili razdoblje oporavka. Ako je HCV RNA prisutna u krvi, koja je određena PCR analizom, to ukazuje na prisutnost virusa u krvi.

Uz pogrešnu tehniku ​​testiranja, transport i abnormalnosti krvi, PCR analiza ponekad može pokazati lažno pozitivne rezultate. Analize ELISA i RIBA u ranim stadijima bolesti, kada tijelo još nije proizvelo dovoljnu količinu antitijela, mogu pokazati lažno negativan rezultat.

Ako se kod dešifriranja testa na hepatitis C dobiju pozitivni rezultati, potrebno je kontaktirati liječnika za infektivne bolesti i gastroenterologa radi daljnje dijagnoze i liječenja.

Smanjili su se segmentirani neutrofili

Dječji trombociti su normalni, povišeni, spušteni

TGT stimulirajući štitnjaču

Dijagnoza hepatitisa

Ne može se odmah utvrditi prisutnost hepatitisa u tijelu, jer razdoblje inkubacije bolesti može trajati do četiri tjedna. Kada se pojave prvi znaci bolesti, u zahvaćenom organizmu javljaju se radikalne promjene u sastavu krvi: biokemijska analiza pokazuje ozbiljan zdravstveni problem i prisutnost patogenog virusa. Međutim, da bismo postavili konačnu dijagnozu, nije dovoljno donirati krv za hepatitis, kao i detaljnu dijagnozu hepatitisa.

Laboratorijska dijagnostika hepatitisa

Poželjno je izvršiti ga nakon završetka perioda inkubacije, tako da liječnik s najvećom preciznošću može odrediti bolest jetre prisutnu u tijelu. Inače, propisano liječenje neće dati željeni terapeutski učinak i čak pogoršati preovladavajuću kliničku sliku.

Dijagnoza hepatitisa A

Tipično, dijagnoza hepatitisa A započinje detaljnim ispitivanjem pacijenta i imenovanjem niza testova koji se moraju provesti što je prije moguće. Ovo je:

  • biokemijski test krvi;
  • potpuna krvna slika;
  • PCR metoda;
  • ELISA;
  • koagulacije.

Ako Botkinova bolest napreduje, onda se prema rezultatima biokemijske analize krvi promatra abnormalan skok bilirubina, AlAT i AsAT, uzorka timola. Štoviše, nastaju specifični anti-HAV IgM, koji su nepobitna činjenica prisutnosti hepatitisa A.
Općenito, analiza krvi određena je padom leukocita, skokom ESR-a i limfocitozom. Ipak, najpouzdanija je PCR metoda koja određuje indikator RNA patogenog virusa.
Osim toga, liječnik proučava simptome bolesti, nakon čega može napraviti konačnu dijagnozu i prijeći na najučinkovitiju terapiju. Potreba za instrumentalnim pregledom je iznimno rijetka. Nakon uspješnog konzervativnog liječenja u uvjetima hospitalizacije i karantene bolesnika, očekuje se konačni oporavak, a hepatitis A se ne ponavlja.

Dijagnoza hepatitisa B

Utvrđivanje prisutnosti virusa hepatitisa B je također moguće prema rezultatima laboratorijskih ispitivanja, a za to je prvo potrebno donirati krv za hepatitis. Po prirodi, patogeni virus ima tri glavna antigena - HBsAg, HBcAg i HBeAg, kojima se u tijelu proizvode antitijela. Glavna značajka ove kliničke slike je ELISA - ELISA, koji samo otkriva specifične markere hepatitisa B.
Odmah bi trebalo pojasniti da se antigen HBsAg pojavljuje u krvi čak i prije prvih simptoma hepatitisa i da se pouzdano utvrdi u ikteričnom razdoblju. Međutim, negativni test ne isključuje prisutnost hepatitisa B i stoga zahtijeva uporabu jednako učinkovite metode lančane reakcije polimeraze (PCR).
Ako sumnjate da je hepatitis B obavezan je biokemijski test krvi koji se preporučuje proći na prvom mjestu. O pojedinačnoj raspravi se radi o biopsiji jetre i ultrazvuku peritonealnih organa, ali kada je povijest bolesti vrlo jasna, nema potrebe za metodama kliničkog ispitivanja.

Ehogram jetre kod autoimunog hepatitisa u stadiju kroničnog hepatitisa

Dijagnoza hepatitisa C

Da bi se postavila ta dijagnoza, nije dovoljno donirati krv za hepatitis, jer virus može prevladati u tijelu u latentnom obliku. Ipak, glavni laboratorijski testovi su sve gore navedene analize, kao i dodatna izvedba biopsije jetre. Ovo mikroskopsko ispitivanje biološkog materijala (u našem slučaju, dio jetrenog tkiva) određuje opseg patološkog procesa i tkivne fibroze. Uzorkovanje materijala provodi se pod lokalnom anestezijom, komplikacije ovakvog postupka su iznimno rijetke u medicinskoj praksi.
Ako se sumnja na hepatitis C, glavna metoda kliničkog pregleda je ultrazvuk peritonealnih organa. Razlog je jednostavan: bolest se često manifestira vizualnom promjenom zahvaćene jetre, promjenama u njezinoj strukturi i veličini. Na taj način možete odrediti:

  • veličina jetre, slezene, gušterače i žučnog mjehura;
  • patološke promjene u tim organima;
  • opći protok krvi u peritonealnim organima;
  • optimalno područje za izvođenje biopsije jetre.

Ova metoda kliničkog pregleda određuje sve fokalne patologije organa na mikroskopskoj razini. Ako je jetra zastupljena na ekranu u sivoj skali, potrebna je trenutna biopsija, jer siva boja vizualizira zahvaćena tkiva "ljudskog filtra".

Prevencija hepatitisa

Budući da se bolest ne manifestira odmah, daleko je od svih kliničkih slika koje se nastavljaju na trenutno liječenje. Pacijent jednostavno ne može biti svjestan postojanja patogenog virusa u tijelu, koji se potom brzo širi u krvotok i inficira zdrave stanice jetre.
Kako bi se izbjegla takva tragična sudbina, preporuča se poštivanje svih preventivnih mjera. Takva budnost će značajno smanjiti rizik obolijevanja i spasiti vas od ozbiljnih zdravstvenih problema u budućnosti. Osnovna pravila prevencije prikazana su u nastavku:

  • operi ruke iza ulice;
  • podvrgnuti visokokvalitetnoj preradi svježeg povrća i voća;
  • provesti sva preventivna cijepljenja navedena u godišnjem kalendarskom planu;
  • selektivan odnos prema seksualnim partnerima;
  • izbjegavati kontakt s bolesnim ljudima;
  • koristite samo šprice za jednokratnu upotrebu i budite posebno oprezni na postajama za transfuziju krvi.

Također se preporučuje da se redovito (jednom svakih šest mjeseci) daje krv za hepatitis, kako bi se osiguralo da virus ne prodire u tijelo, te ne inficira zdrave stanice jetre. Ako se utvrdi dijagnoza, potrebno je odmah postati dispanzer i slijediti sve preporuke stručnjaka.

Autor publikacije:
Syropyatov Sergej Nikolajevič
Obrazovanje: Državno medicinsko sveučilište u Rostovu (Državno medicinsko sveučilište u Rostovu), Odjel za gastroenterologiju i endoskopiju.
gastroenterolog
Doktor medicinskih znanosti

ELISA metoda za otkrivanje hepatitisa

Moderna medicina poznata je po mnogim bolestima jetre. HCV (virusni hepatitis C) je jedan od najčešćih i opasnih jer se infekcija često razvija asimptomatski i dovodi do kritičnih komplikacija, čak i smrti. Zato je pravovremena dijagnoza bolesti, koja se provodi različitim metodama, uključujući enzimski imunosorbentni test (ELISA) za otkrivanje antitijela na virus u krvi, od najveće važnosti.

Izjava o HCV infekciji za dijagnozu hepatitisa

U laboratorijskoj dijagnostici za otkrivanje hepatitisa C (HCV infekcija) koriste se dvije vrste metoda:

  1. Serološki, zasnovan na otkrivanju antitijela na virus hepatitisa C (anti-HCV), također nazvan ELISA (enzimski imunosorbentni test). Namijenjen je otkrivanju anti-HCV (IgM i IgG markera) koji se koriste za probiranje i dijagnosticiranje hepatitisa C. Oba ova markera mogu se otkriti u krvi (plazmi) u različitim kombinacijama, što zahtijeva odgovarajuću kliničku interpretaciju. Da bi se potvrdila prisutnost anti-HCV, proveden je RIBA (rekombinantni imunoblot) test.
  2. Molekularno biološko, s ciljem otkrivanja RNA virusa. HCV RNA test je propisan za sljedeće kategorije bolesnika:
    • s identificiranim anti-HCV;
    • bez detektiranog anti-HCV, ali s utvrđenim epidemiološkim i kliničkim podacima koji zahtijevaju isključivanje akutnog oblika HCV.

RNA virusa može se otkriti u krvi već 14 dana nakon infekcije, tj. Prije pojave anti-HCV-a koji se javlja tijekom prva 2-3 mjeseca.

Za konačnu potvrdu dijagnoze (osobito kada se otkrije samo jedan od dva markera HCV infekcije), stručnjaci preporučuju da se nakon određenog vremena ponavljaju ponovljeni testovi anti-HCV i HCV RNA.

Detekcija hepatitisa pomoću ELISA

Za provedbu rane dijagnoze virusnog hepatitisa, osobito asimptomatskih, anikteričnih oblika, u serumu, otkrivena je prisutnost virusnih proteina (antigena) ili protutijela na njih (proizvedenih od strane imunološkog sustava kada virus ulazi u tijelo) pomoću enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA). To je univerzalna metoda imunološke dijagnoze, njezina suština leži u proučavanju interakcije "antigen-antitijelo". Široko se primjenjuje u mnogim zemljama svijeta.

Određivanje hepatitisa ELISA-om omogućava ne samo da se uspostavi točna dijagnoza, već i da se procijeni priroda bolesti, kao i da se odabere kompetentno i učinkovito liječenje tradicionalnim lijekovima (interferon, ribavirin), lijekovi izravnog djelovanja (Sofosbuvir, Daclatasvir) i njihovi generički proizvodi indijske i kineske proizvodnje.

Kad god je to moguće, dijagnozu virusnog hepatitisa ELISA-om dopunjuje PCR (lančana reakcija polimeraze), koja omogućuje određivanje prisutnosti virusa hepatitisa u RNA.

Koliko je točna metoda enzimskog imunotestiranja

Prema stručnim procjenama, točnost ELISA metode je 95%, odnosno 95 od 100 pacijenata koji koriste enzimski imunotest, prisutnost i količina HCV protutijela - IgM i IgG može se otkriti u krvi. Ako je rezultat pozitivan, moguće je dijagnosticirati HCV kontakt s tijelom (a ne samim virusom, odnosno prisutnost protutijela u krvi do njega, što može biti posljedica već prenesene bolesti).

Međutim, unatoč visokoj osjetljivosti imunosorbentnog testa vezanog na enzim (ELISA), u 40% bolesnika s pozitivnim rezultatom, virus se možda neće otkriti, što ukazuje na sumnjiv ili lažno pozitivan rezultat.

Kako bi se potvrdila ispravnost ELISA rezultata, RIBA metoda (rekombinantni imunobloting) koristi se za točnije istraživanje detekcije antitijela na HCV.

Ispitivanje NC NC jezgre

Učinkovite studije za određivanje prisutnosti antitijela na hepatitis viruse uključuju anti-HCV jezgru, koja se koristi kao potvrdni test kada se dobiju "nesigurni" rezultati.

Ako se anti-HCV jezgra detektira u serumu u razrjeđenju od 1: 1000, vjerojatno će se dijagnosticirati pozitivan rezultat, tj. Bolest je prisutna.

Ako su uzorci u razrjeđenju 1: 1000 negativni, u razrjeđenju 1: 200 pozitivni, potrebno je istraživanje prisutnosti virusne RNA. U ovom slučaju, najvjerojatnije nema HCV infekcije.

Važno je razumjeti da se u kroničnim oblicima HCV-a stalno otkrivaju antitijela, a tijekom eliminacije (uklanjanja iz stanica tijela) virusa, oni traju 4-8 godina ili više. Zbog toga prisutnost anti-HCV-a ne ukazuje uvijek na infekciju organizma i ne dopušta objektivne zaključke o aktivnosti procesa.Za dobivanje točnih podataka o količini virusa, stupnju oštećenja jetre, trajanju infekcije i razlici između akutnih i kroničnih oblika bolesti, preporuča se koristiti definiciju spektra antitijela za različite HCV peptida. Također je važno promatrati njihovu kvantitativnu i kvalitativnu dinamiku.

ELISA analiza - od skrininga za HbsAg do složene dijagnostike

Uvođenjem suvremenih tehnologija u medicini, rastu mogućnosti imunokemijskih dijagnostičkih metoda koje su u stanju brzo i točno prepoznati bolest, kada su druge metode nemoćne. Shvaćanje da je virus hepatitisa B sposoban da se nalazi u tijelu u vrlo niskoj koncentraciji, pri čemu ga se ne može otkriti čak ni pouzdanom metodom kao što je PCR, čini potrebnim svježi pogled na problem dijagnosticiranja ove bolesti i uvažavanje mogućnosti imunološkog testa.

U ovom ćemo materijalu detaljno analizirati sve što se odnosi na ovu vrstu laboratorijskih istraživanja. Naučit ćete što je enzimski imunološki test i kako se on provodi, što je australski antigen i kako se određuje, kakve su nerazumljive kratice Hbs ag, Hbcor, njihova uloga u dešifriranju analize, kao i dobiti više korisnih i zanimljivih informacija.

Sadržaj članka:

Opće informacije o ELISA-i

ELISA (skraćena ELISA) je laboratorijska dijagnostička metoda koja može otkriti i antigene i antitijela iz širokog spektra infekcija, uključujući hepatitis B. Trenutno poznavanje svojstava virusa i obilježja imunološkog odgovora tijela, ne samo da otkriva infekciju, nego je i identificira. fazi, učinkovitost cijepljenja i ocijeniti učinkovitost liječenja.

Suština imunološkog testa enzima

ELISA se temelji na reakciji "antigen-antitijelo", odnosno na njenim svojstvima.

Kao odgovor na invaziju strane supstance (antigena), koja su posebno proteini virusa, tijelo proizvodi zaštitne proteine ​​- antitijela. Antitijela ulaze u kompleksnu reakciju s antigenom, blokirajući njegovu aktivnost.

U nastavku ćemo više govoriti o antigenima i antitijelima, ali sada ćemo primijetiti da su za svaki antigen strogo individualni, ili kako kažu liječnici, homologna antitijela. Stoga, ako želimo otkriti specifičan antigen u krvi, koristit ćemo dijagnostičku tabletu s antitijelima. Ako postoji antigen u krvi, on će reagirati s antitijelima, koja se mogu otkriti na različite načine. I obrnuto. Ako želimo pronaći antitijela, trebamo tabletu s odgovarajućim antigenom.

Najčešće, dijagnostička vrijednost nosi samo antitijela s kojima možete dijagnosticirati gotovo svaku infekciju. Međutim, posebnost virusa hepatitisa B je u tome što glavnu ulogu u dijagnozi ima jedan od antigena - australski antigen.

Kako je IFA

Razmotrite tipičan ELISA postupak za specifičan primjer kada želite identificirati antitijela na patogen.

Za dijagnostiku koristi se tableta s 96 jažica, koje su pre-zasićene odgovarajućim antigenom. Nadalje, postupak je sljedeći:

serum se primjenjuje na sve stanice;

homologna antitijela reagiraju s antigenom i vežu se na ploču;

tableta oprana, uklanjanje nevezanih antitijela;

tada se u stanice unosi enzimatska oznaka - tvar koja reagira s antitijelima i uzrokuje bojenje sadržaja stanice.

To je standardni ELISA postupak s bojanjem, koji se koristi, na primjer, u imunokromatografskim test trakama.

ELISA nije ograničena na kvalitativno određivanje antitijela ili antigena patogena. Što je više antitijela sadržano u stanicama tablete, intenzivnija je obojena otopina. Uspoređujući svoju optičku gustoću s kontrolom, moderna oprema može prilično točno izračunati koncentraciju antitijela po jedinici volumena. Tako se provodi kvantitativna ELISA, mjera mjerenja na kojoj su najčešće jedinice optičke gustoće (EOP).

Imunokemiluminiscentna analiza

Danas postoji nekoliko desetaka tipova ELISA testova, od kojih svaki ima prednost. Najpopularnija u dijagnostici hepatitisa B je imunokemiluminiscentna analiza.

Enzimska oznaka za ovu analizu nisu kromatini, kao u standardnoj ELISA-i, već posebne tvari - fosfori koji uzrokuju da kompleks kompleksne u ultraljubičastom svjetlu.

Pomoću posebnog uređaja - luminometra, možete točno odrediti razinu emisije i, kao posljedicu, koncentraciju željene tvari.

Primjenom ELISA metoda utvrđuju se gotovo svi postojeći antigeni virusa hepatitisa B i njihova antitijela.

Antigeni virusa hepatitisa B: Hbs, Hbe i Hbc

Izraz antigen (antigen) dolazi od dvije engleske riječi: antitijela - antitijela i generatora - proizvođača. Dakle, pod antigen razumjeti bilo koju tvar koja uzrokuje stvaranje antitijela u tijelu na njega. Najčešći antigeni su proteinski spojevi.

Danas su poznata tri antigena virusa hepatitisa B: hbsag, hbc i hbe.

Australski antigen

Protein koji je dio vanjske ljuske patogena hepatitisa B otkriven je mnogo prije otkrića samog virusa. Ovaj antigen dobio je ime jer je prvi put identificiran od autohtonih stanovnika Australije. Međutim, u početku se proteini nisu smatrali antigenom, već potpuno zajedničkim elementom krvi među starosjediocima, a svijest o njegovoj povezanosti s bolestima jetre došla je malo kasnije.

Dugotrajno čuvanje antigena u krvi i odsutnost antitijela ukazuje na mogućnost stvaranja HBeAg-pozitivnog kroničnog hepatitisa B

Danas se u stručnoj literaturi praktički ne može pronaći naziv „australski antigen“ i zamijenjen je međunarodnom skraćenicom - HbsAg (površinski antigen hepatitisa b - površinski antigen hepatitisa B). Osim toga, možete pronaći kratice hbs antigena ili samo hbs. Svaka od ovih kratica je prihvatljiva i može se dopuniti snimanjem HBV ili HBV - virusa hepatitisa B (virus hepatitisa b).

Površinski antigen virusa hepatitisa B ima jednu izvanrednu značajku koja ga čini nezamjenjivim dijagnostičkim markerima - njegova koncentracija u krvi može doseći vrlo visoke razine, do pola miligrama po mililitru krvi. To je zato što samo mali dio novih HBsAg, koji se formiraju tijekom reprodukcije virusa hepatitisa B, odlaze na izgradnju membrana novih virusnih čestica, a ostatak - slobodno cirkuliraju u krvi. Kao rezultat toga, broj čestica hbs u krvi može premašiti broj viriona na stotine tisuća puta.

Ova značajka čini australski antigen glavnim markerjem u dijagnostici hepatitisa B, koji se otkriva u krvi već 4-6 tjedana nakon infekcije. Kako se formiraju antitijela, površinski antigen se postupno zamjenjuje njima. Ako se nakon 6 mjeseci HBsAg nastavi, to ukazuje na prijelaz infekcije u kronični oblik.

Nedavno je, kada je postalo moguće odrediti koncentraciju hbs hbs, njegova uloga u dijagnostici još više porasla, budući da oslanjanje na razinu antigena može razlikovati kronični hepatitis B (HBV) od zdravog nositelja, kao i pratiti učinkovitost liječenja.

Antigeni jezgre

U jezgri virusa - nukleokapsid - su proteini koji kontroliraju reprodukciju virusa HBcoreAg i HBeAg.

HBcoreAg, koji se također može nazvati HBCore-antigen, hbc ili sržni antigen, može se naći samo u tkivima jetre, izravno u jezgrama hepatocita. Ovaj antigen nije otkriven u krvi i nema dijagnostičku vrijednost.

Struktura virusa hepatitisa

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - naprotiv, igra važnu ulogu u dijagnozi. HBeAg i HBcoreAg su bliski srodnici. Oni imaju veliku sličnost strukture i razlikuju se uglavnom u prostornom položaju molekula. Za razliku od HBcore, HBe nije dio zida nukleokapsida i slobodno cirkulira u krvi.

Uloga HBe u infektivnom procesu nije dovoljno jasna, međutim, posebnosti njezina ponašanja i njihovog odnosa s tijekom infektivnog procesa već su dovoljno istražene. HBeAg ukazuje na aktivnu reprodukciju virusa i omogućuje pouzdano određivanje faze kroničnog CHB - HBeAg - pozitivnog ili HBeAg - negativnog.

HBe se može otkriti u krvi već u razdoblju inkubacije akutnog virusa hepatitisa B (HBV), dok visoka koncentracija HBeAg tijekom 3 tjedna najvjerojatnije ukazuje na prijetnju kroničnog procesa. Koncentracija HBe izravno je povezana sa sadržajem Dane čestica (takozvane čestice virusa hepatitisa B) - što je veća količina HBe, to je veća koncentracija HBV DNA u krvi.

HBeAg je glavni marker infektivnosti bolesti. Krv HBeAg-pozitivnih pacijenata mnogo je zaraznija nego HBeAg-negativna. Na primjer, u trudnica pozitivnih za HBe i Hbs, vjerojatnost prijenosa infekcije djetetu doseže 50%, dok je vjerojatnost takvog događaja u HBe-negativnom, ali Hbs pozitivnih majki 10-30%.

Hbe određuje tijek kroničnog hepatitisa. HBeAg-pozitivni kronični hepatitis B ima mnogo nepovoljniju prognozu u smislu razvoja ciroze.

To je vjerojatno sve što trebate znati o HBV antigenima, a prelazimo na drugu skupinu markera hepatitisa B - antitijela.

Što znači pozitivan ili negativan rezultat EIA za hepatitis C?

Kako bi se precizno odredila vrsta hepatitisa nakon preliminarne dijagnoze, predvidjeti tijek bolesti, utvrditi stupanj njegovog razvoja, koristiti različite serološke studije. Najtočniji podaci dobiveni su nakon enzimskog imunološkog testa. Primjenom ELISA hepatitisa C dijagnosticiran je u 95% slučajeva. Upravo ova analiza omogućuje detektiranje antitijela antivirusnog sustava protiv hepatitisa C (HCV antivirus) i procjenu ne samo stupnja aktivnosti patološkog procesa, već i razine učinkovitosti antivirusne terapije koju je propisao liječnik i provodi se pod njegovom kontrolom.

Kada je potrebno istraživanje i njegove značajke

Hepatitis C je najopasniji tip ove bolesti, jer ima dugo latentno (latentno) razdoblje i opasne posljedice. Da bi se izbjegla pojava i razvoj ispravne i pravodobne dijagnoze, jedna od najinformativnijih metoda za koju se priznaje imunoanaliza.

Prisutnost HCV infekcije u krvi bolesnika moguće je potvrditi pomoću seroloških biljega, a analiza koja se temelji na kompleksu strukturnih i nestrukturalnih virusnih peptida omogućuje dobivanje najcjelovitijih i najpouzdanijih podataka o postojanju antitijela. Kod zdravih ljudi, antitijela na virus hepatitisa C u krvi pacijenta su odsutna, a njihova detekcija ukazuje na prisutnost patogena i razvoj patološkog procesa.

Tijekom istraživanja, stručnjaci identificiraju ukupna protutijela IgM i IgG razreda koja su izravno povezana s strukturnim i nestrukturalnim proteinima HCV-a. Provedba ove studije omogućuje nam da u ranoj fazi bolesti identificiramo pacijente zaražene virusom hepatitisa C. Prisutnost ukupnih protutijela u krvi pacijenta ukazuje na početak bolesti ili prethodnu infekciju.

Početak bolesti je indiciran prisutnošću protutijela klase IgM, a hepatitis tipa C može se procijeniti prema detektiranim protutijelima IgG razreda. Oni postaju potvrda oporavka (završni stadij bolesti), za što je karakterističan anatomski i funkcionalni oporavak zahvaćenih organa.

Pravovremena provedena ELISA (ELISA) omogućuje identifikaciju patološkog procesa u ranom stadiju razvoja, dijagnosticiranje bolesti s visokom točnošću i povećanje šanse za brz oporavak. ELISA test omogućuje utvrđivanje ne samo prisutnosti virusa, nego i broja specifičnih ukupnih antivirusnih antitijela.

  1. Žene u stanju trudnoće prilikom prijave u antenatalnu kliniku.
  2. Bolesnici koji imaju simptome akutnog ili kroničnog hepatitisa.
  3. Medicinski stručnjaci koji su stalno u kontaktu s biološkim materijalima.
  4. Pacijenti s dijagnozom AIDS-a.
  5. Građani ovisnici o drogama.
  6. Pacijenti s alkoholizmom i oni koji vode asocijalni stil života.

Upućivanje na ELISA test (enzimski imunotest) i primanje službenika za provedbu zakona ili zaposlenika javnih službi. Potreba za ELISA-om pojavljuje se ako sumnjate na povredu funkcije jetre ili kada primate upitne podatke o stanju organa nakon ultrazvuka. Liječnik može dati pacijentu uputnicu za ELISA test krvi ako se radi o složenom kirurškom zahvatu. Ako žena (osobito starija od 30 godina) planira trudnoću, a povišene vrijednosti bilirubina ili transferaze (ALT, AST) nalaze se u testu krvi.

Specifična anti-virusna IgG antitijela otkrivena su nekoliko godina. Njihova se koncentracija postupno smanjuje, što potvrđuje pozitivnu dinamiku. Što se tiče kroničnog hepatitisa C, u ovom slučaju, broj ukupnih anti-HCV antitijela se ne mijenja. Točna dijagnoza temelji se na određivanju razine IgM antitijela.

Tijek hepatitisa C ovisi o genotipu virusa koji je uzrokovao razvoj bolesti. Poznato je 11 modernih vrsta lijekova. U najtežim situacijama moguća je infekcija s nekoliko genotipova virusa, a jedna od njih uvijek se pokazuje dominantnom. Samo točna dijagnoza pomoći će odabrati najučinkovitije lijekove za učinkovitu terapiju, odabrati njihovu dozu i odrediti trajanje terapijskih intervencija.

Evaluacija rezultata istraživanja

Da bi se postavila dijagnoza sumnjivog hepatitisa C i dobili indikativni podaci o količini i kvaliteti patogena, provodi se enzimski imunosorbentni test (ELISA), tijekom kojeg specijalisti dobivaju potvrdu prisutnosti virusa u tijelu i mogu ocijeniti njegovu aktivnost.

Ovom studijom možemo izvući zaključke o:

  • virusno opterećenje;
  • rizik od razvoja kroničnog procesa;
  • aktivnost reprodukcije (replikacije) molekule HCV RNA;
  • trajanje patološkog procesa;
  • stupanj oštećenja jetre.

Procjenjuje se i stupanj rizika od kronične bolesti. Identificirani pomoću ELISA antivirusnih HCV antitijela ukazuju na replikaciju virusa. Konačni rezultati zahtijevaju potvrdu s točnijim istraživanjima.

Kvalitativna procjena rezultata enzimskog imunološkog testa izražena je kao pozitivan ili negativan rezultat. ELISA omogućuje detekciju hepatitisa C u ranom stadiju razvoja bolesti, kao i tijekom bolesti u anikteričnom obliku.

Analiza ima određene prednosti, uključujući:

  1. Točnost kvalitativnih i kvantitativnih pokazatelja.
  2. Minimalno vrijeme studiranja.
  3. Fazni test.

Enzimska imunotest je jedna od anketa koje se odlikuju visokom točnošću, ali unatoč svim prednostima, u nekim slučajevima to ne omogućuje identifikaciju patogena prisutnog u ljudskom tijelu.

Za istraživanje, laboratorijski asistent uzima pacijentovu vensku krv i stavlja je u posebne spremnike. Nakon određenog vremena, antigeni (strani mikroorganizmi) su pričvršćeni na stijenke posude. Stručnjak umeće imunoglobuline (antitijela) u posudu i traži imunološki odgovor.

Dobiveni rezultati uspoređuju se s podacima posebno sastavljene tablice. Rezultat se ocjenjuje kao:

Pozitivna, što ukazuje na prisutnost akutnog oblika bolesti, ako se tijekom ispitivanja utvrdi prisustvo protutijela klase IgA, IgG, IgM.

Negativno - nisu otkrivena sva tri tipa antitijela, nema ih.

Lažno pozitivan - ELISA rezultat je pozitivan, ali nije potvrđen nakon PCR (lančana reakcija polimeraze).

Sumnjičavost - markeri u krvi nisu otkriveni u prisutnosti hepatitisa C. To je moguće s prerano postavljenom dijagnozom. Potrebna je ponovljena analiza nakon 2-3 tjedna. Za točnu dijagnozu napravite PCR analizu.

Lažno negativan rezultat analize moguć je kod pacijenata koji uzimaju lijekove koji imaju inhibitorni učinak na obrambeni sustav tijela.

I lažno pozitivni i lažno negativni rezultati analize mogući su iz nekoliko razloga. Prije svega, to je minimalno virusno opterećenje u vrlo ranom stadiju razvoja bolesti. Jednako je važno stanje imunološkog sustava pacijenta i njegove osobine. Rezultati istraživanja značajno utječu na primjenu lijekova iz skupine imunosupresiva.

Nemoguće je biti potpuno siguran u točnost rezultata enzimskog imunološkog testa, ako je pacijent žena u stanju trudnoće. Lažni rezultati mogući su u slučajevima kada se analiza provodi za pacijente koji pate od autoimunih oboljenja, onkoloških bolesti s benignim tumorima.

Dodatna istraživanja provode se ako je pacijent nedavno pretrpio ozbiljnu zaraznu bolest, dijagnosticiran je metabolički poremećaj ili kvar endokrinog sustava. Ako je sastav krvi povišen razina heparina ili značajno smanjena razina elemenata u tragovima.

Točnost analize može se povećati poštivanjem postojećih pravila pripreme za isporuku:

  1. Krv se daruje samo na prazan želudac. Zadnji obrok je dopušten najmanje 8-10 sati prije sakupljanja materijala.
  2. Navečer, prije analize, potrebno je odbiti jesti masne, pržene, začinjene, dimljene proizvode i jela.
  3. Ne može se govoriti o konzumiranju alkohola.
  4. Bolje je prestati pušiti dan prije darivanja krvi.

Enzimski imunosorbentni test može se provesti samo za one pacijente koji trenutno ne pate od kataralnih, upalnih ili zaraznih bolesti i ne žale se na bolest.

Kršenje navedenih pravila i zahtjeva dovodi do činjenice da je rezultat analize ocijenjen lažno pozitivnim. Ova situacija se razvija u 15-20% slučajeva. Međutim, za potpuno povjerenje, liječnici upućuju pacijente na dodatni pregled, tijekom kojeg trebaju dati krv za PCR.

Lančana reakcija polimeraze

Dijagnoza nije moguća samo na temelju rezultata ELISA analize. Prisutnost protutijela nije dokaz postojanja patogenog virusa u tijelu u vrijeme ispitivanja. Pogrešno testiranje može izazvati živčani slom ili čak akutniju reakciju pacijenta. Dijagnoza na temelju rezultata ELISA-e nije točna. Potrebna su dodatna istraživanja, čiji će rezultati dati konačnu presudu liječnika.

Važno je zapamtiti da je lažno pozitivan rezultat testa moguć kod ljudi koji trenutno pate od drugih zaraznih bolesti, ali imunološki sustav nije ispravno reagirao na prodiranje patogena ili virusa u tijelo.

Dijagnosticiranje hepatitisa C omogućuje brojne laboratorijske pretrage, među kojima posebno mjesto zauzima imunosorbentni test enzima (ELISA). Kvalitativna procjena pokazatelja definirana je kao pozitivan ili negativan rezultat. Odsustvo virusa hepatitisa B u krvi pacijenta je norma, ali u nekim slučajevima, nakon istraživanja, stručnjaci navode da su u biološkom materijalu pronađene neznatne koncentracije nekih RNA fragmenata (ribonukleinske kiseline). Identificirajte ih pomoću PCR-a (lančana reakcija polimeraze).

Ovaj test krvi omogućuje identifikaciju uzročnika hepatitisa C u ranom stadiju razvoja bolesti i postavljanje dijagnoze s velikom točnošću. Studija se temelji na činjenici da virusi u svojoj strukturi imaju molekule DNA (hepatitis B) ili RNA (hepatitis C).

Tijekom analize PCR-a korištenjem posebnog tretmana uzoraka krvi bolesnika:

  • povećati koncentraciju molekula nukleinskih kiselina;
  • odrediti njihovu vrstu;
  • utvrditi vrstu patogena.

Ako u ljudskoj krvi postoji mala količina fragmenata patogene RNA, svi će se otkriti pomoću PCR. To omogućuje preciznu dijagnozu. Glavna razlika ove analize od svih drugih metoda istraživanja je 100% točna dijagnoza.

Ova se analiza provodi u proučavanju krvi trudnica koje su se prijavile u antenatalnu kliniku radi registracije, sa sumnjom na hepatitis C s dugim latentnim (latentnim) razdobljem, s poteškoćama u izradi točne dijagnoze ELISA. PCR je neophodan u slučajevima kada je nakon enzimskog imunološkog testa dobiven sumnjiv rezultat.

Virus hepatitisa C u ovoj situaciji je u tijelu pacijenta, ali još nije izazvao brz razvoj bolesti. To je latentni tijek bolesti. Analiza se provodi vrlo brzo, jer nema potrebe za uzgojem patogena pomoću hranjivog medija da bi se dobio rezultat. Glavna razlika između PCR i enzimski imunosorbentnog testa (ELISA) je u tome što u ovoj studiji ne postoji takva stvar kao lažno-pozitivan ili sumnjiv rezultat.