ELISA analiza - od skrininga za HbsAg do složene dijagnostike

Uvođenjem suvremenih tehnologija u medicini, rastu mogućnosti imunokemijskih dijagnostičkih metoda koje su u stanju brzo i točno prepoznati bolest, kada su druge metode nemoćne. Shvaćanje da je virus hepatitisa B sposoban da se nalazi u tijelu u vrlo niskoj koncentraciji, pri čemu ga se ne može otkriti čak ni pouzdanom metodom kao što je PCR, čini potrebnim svježi pogled na problem dijagnosticiranja ove bolesti i uvažavanje mogućnosti imunološkog testa.

U ovom ćemo materijalu detaljno analizirati sve što se odnosi na ovu vrstu laboratorijskih istraživanja. Naučit ćete što je enzimski imunološki test i kako se on provodi, što je australski antigen i kako se određuje, kakve su nerazumljive kratice Hbs ag, Hbcor, njihova uloga u dešifriranju analize, kao i dobiti više korisnih i zanimljivih informacija.

Sadržaj članka:

Opće informacije o ELISA-i

ELISA (skraćena ELISA) je laboratorijska dijagnostička metoda koja može otkriti i antigene i antitijela iz širokog spektra infekcija, uključujući hepatitis B. Trenutno poznavanje svojstava virusa i obilježja imunološkog odgovora tijela, ne samo da otkriva infekciju, nego je i identificira. fazi, učinkovitost cijepljenja i ocijeniti učinkovitost liječenja.

Suština imunološkog testa enzima

ELISA se temelji na reakciji "antigen-antitijelo", odnosno na njenim svojstvima.

Kao odgovor na invaziju strane supstance (antigena), koja su posebno proteini virusa, tijelo proizvodi zaštitne proteine ​​- antitijela. Antitijela ulaze u kompleksnu reakciju s antigenom, blokirajući njegovu aktivnost.

U nastavku ćemo više govoriti o antigenima i antitijelima, ali sada ćemo primijetiti da su za svaki antigen strogo individualni, ili kako kažu liječnici, homologna antitijela. Stoga, ako želimo otkriti specifičan antigen u krvi, koristit ćemo dijagnostičku tabletu s antitijelima. Ako postoji antigen u krvi, on će reagirati s antitijelima, koja se mogu otkriti na različite načine. I obrnuto. Ako želimo pronaći antitijela, trebamo tabletu s odgovarajućim antigenom.

Najčešće, dijagnostička vrijednost nosi samo antitijela s kojima možete dijagnosticirati gotovo svaku infekciju. Međutim, posebnost virusa hepatitisa B je u tome što glavnu ulogu u dijagnozi ima jedan od antigena - australski antigen.

Kako je IFA

Razmotrite tipičan ELISA postupak za specifičan primjer kada želite identificirati antitijela na patogen.

Za dijagnostiku koristi se tableta s 96 jažica, koje su pre-zasićene odgovarajućim antigenom. Nadalje, postupak je sljedeći:

serum se primjenjuje na sve stanice;

homologna antitijela reagiraju s antigenom i vežu se na ploču;

tableta oprana, uklanjanje nevezanih antitijela;

tada se u stanice unosi enzimatska oznaka - tvar koja reagira s antitijelima i uzrokuje bojenje sadržaja stanice.

To je standardni ELISA postupak s bojanjem, koji se koristi, na primjer, u imunokromatografskim test trakama.

ELISA nije ograničena na kvalitativno određivanje antitijela ili antigena patogena. Što je više antitijela sadržano u stanicama tablete, intenzivnija je obojena otopina. Uspoređujući svoju optičku gustoću s kontrolom, moderna oprema može prilično točno izračunati koncentraciju antitijela po jedinici volumena. Tako se provodi kvantitativna ELISA, mjera mjerenja na kojoj su najčešće jedinice optičke gustoće (EOP).

Imunokemiluminiscentna analiza

Danas postoji nekoliko desetaka tipova ELISA testova, od kojih svaki ima prednost. Najpopularnija u dijagnostici hepatitisa B je imunokemiluminiscentna analiza.

Enzimska oznaka za ovu analizu nisu kromatini, kao u standardnoj ELISA-i, već posebne tvari - fosfori koji uzrokuju da kompleks kompleksne u ultraljubičastom svjetlu.

Pomoću posebnog uređaja - luminometra, možete točno odrediti razinu emisije i, kao posljedicu, koncentraciju željene tvari.

Primjenom ELISA metoda utvrđuju se gotovo svi postojeći antigeni virusa hepatitisa B i njihova antitijela.

Antigeni virusa hepatitisa B: Hbs, Hbe i Hbc

Izraz antigen (antigen) dolazi od dvije engleske riječi: antitijela - antitijela i generatora - proizvođača. Dakle, pod antigen razumjeti bilo koju tvar koja uzrokuje stvaranje antitijela u tijelu na njega. Najčešći antigeni su proteinski spojevi.

Danas su poznata tri antigena virusa hepatitisa B: hbsag, hbc i hbe.

Australski antigen

Protein koji je dio vanjske ljuske patogena hepatitisa B otkriven je mnogo prije otkrića samog virusa. Ovaj antigen dobio je ime jer je prvi put identificiran od autohtonih stanovnika Australije. Međutim, u početku se proteini nisu smatrali antigenom, već potpuno zajedničkim elementom krvi među starosjediocima, a svijest o njegovoj povezanosti s bolestima jetre došla je malo kasnije.

Dugotrajno čuvanje antigena u krvi i odsutnost antitijela ukazuje na mogućnost stvaranja HBeAg-pozitivnog kroničnog hepatitisa B

Danas se u stručnoj literaturi praktički ne može pronaći naziv „australski antigen“ i zamijenjen je međunarodnom skraćenicom - HbsAg (površinski antigen hepatitisa b - površinski antigen hepatitisa B). Osim toga, možete pronaći kratice hbs antigena ili samo hbs. Svaka od ovih kratica je prihvatljiva i može se dopuniti snimanjem HBV ili HBV - virusa hepatitisa B (virus hepatitisa b).

Površinski antigen virusa hepatitisa B ima jednu izvanrednu značajku koja ga čini nezamjenjivim dijagnostičkim markerima - njegova koncentracija u krvi može doseći vrlo visoke razine, do pola miligrama po mililitru krvi. To je zato što samo mali dio novih HBsAg, koji se formiraju tijekom reprodukcije virusa hepatitisa B, odlaze na izgradnju membrana novih virusnih čestica, a ostatak - slobodno cirkuliraju u krvi. Kao rezultat toga, broj čestica hbs u krvi može premašiti broj viriona na stotine tisuća puta.

Ova značajka čini australski antigen glavnim markerjem u dijagnostici hepatitisa B, koji se otkriva u krvi već 4-6 tjedana nakon infekcije. Kako se formiraju antitijela, površinski antigen se postupno zamjenjuje njima. Ako se nakon 6 mjeseci HBsAg nastavi, to ukazuje na prijelaz infekcije u kronični oblik.

Nedavno je, kada je postalo moguće odrediti koncentraciju hbs hbs, njegova uloga u dijagnostici još više porasla, budući da oslanjanje na razinu antigena može razlikovati kronični hepatitis B (HBV) od zdravog nositelja, kao i pratiti učinkovitost liječenja.

Antigeni jezgre

U jezgri virusa - nukleokapsid - su proteini koji kontroliraju reprodukciju virusa HBcoreAg i HBeAg.

HBcoreAg, koji se također može nazvati HBCore-antigen, hbc ili sržni antigen, može se naći samo u tkivima jetre, izravno u jezgrama hepatocita. Ovaj antigen nije otkriven u krvi i nema dijagnostičku vrijednost.

Struktura virusa hepatitisa

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - naprotiv, igra važnu ulogu u dijagnozi. HBeAg i HBcoreAg su bliski srodnici. Oni imaju veliku sličnost strukture i razlikuju se uglavnom u prostornom položaju molekula. Za razliku od HBcore, HBe nije dio zida nukleokapsida i slobodno cirkulira u krvi.

Uloga HBe u infektivnom procesu nije dovoljno jasna, međutim, posebnosti njezina ponašanja i njihovog odnosa s tijekom infektivnog procesa već su dovoljno istražene. HBeAg ukazuje na aktivnu reprodukciju virusa i omogućuje pouzdano određivanje faze kroničnog CHB - HBeAg - pozitivnog ili HBeAg - negativnog.

HBe se može otkriti u krvi već u razdoblju inkubacije akutnog virusa hepatitisa B (HBV), dok visoka koncentracija HBeAg tijekom 3 tjedna najvjerojatnije ukazuje na prijetnju kroničnog procesa. Koncentracija HBe izravno je povezana sa sadržajem Dane čestica (takozvane čestice virusa hepatitisa B) - što je veća količina HBe, to je veća koncentracija HBV DNA u krvi.

HBeAg je glavni marker infektivnosti bolesti. Krv HBeAg-pozitivnih pacijenata mnogo je zaraznija nego HBeAg-negativna. Na primjer, u trudnica pozitivnih za HBe i Hbs, vjerojatnost prijenosa infekcije djetetu doseže 50%, dok je vjerojatnost takvog događaja u HBe-negativnom, ali Hbs pozitivnih majki 10-30%.

Hbe određuje tijek kroničnog hepatitisa. HBeAg-pozitivni kronični hepatitis B ima mnogo nepovoljniju prognozu u smislu razvoja ciroze.

To je vjerojatno sve što trebate znati o HBV antigenima, a prelazimo na drugu skupinu markera hepatitisa B - antitijela.

Suština i dijagnoza hepatitisa B

Čim se faza pretvori u žuticu, intigumenti i sluznice počinju požutjeti, zdravstveno stanje se naglo pogoršava. Važno je naglasiti da jetra raste i izrasta ispod skeleta. Bojenje kože u žutoj nijansi odvija se postupno. Količina jetrenih enzima raste u krvi, a uzorak timola se ne mijenja.

Dijagnosticiranje bolesti: osnovne metode i pojmovi

Dijagnoza hepatitisa B provodi se na nekoliko načina:

1. Za početak, liječnik mora uzeti anamnezu i provesti temeljiti pregled osobe. Tijekom istraživanja veliki naglasak stavljen je na trenutke kao što su:

• je li uvođenje lijekova ili drugih sredstava za intravensko davanje;
• je li bilo transfuzija krvi;
• jesu li izvršene kirurške intervencije;
• je li prisutno oštećenje integriteta kože;
• koji su seksualni odnosi;
• je li pacijent imao kontakt s bolesnikom s hepatitisom B ili njegovim nositeljem.

Ako je došlo do bilo koje od ovih stavki, ona je određena koliko dugo. Tipično, infekcija se javlja kod kontaktiranja od 6 tjedana do 6 mjeseci prije pojave prvih simptoma hepatitisa.

2. Laboratorijska dijagnostika hepatitisa B, ELISA analiza krvi za antigene i protutijela za hepatitis B. Cilj ovog pregleda je identificirati 3 antigena:

• HBsAg (antigen, smješten površinski),
• HBcAg (nalazi se unutra)
• HBeAg (povezan s prethodnim antigenom). Bolest je karakterizirana ranim otkrivanjem ovih antigena u krvi.

Osobe koje pate od hepatitisa B i sadrže te antigene u krvi vrlo su zarazne. Oni mogu zaraziti druge ljude. Ako HBsAg nije prisutan u ljudskoj krvi, to znači da je zdrav. Ako je osoba bolesna, tijelo počinje izlučivati ​​antitijela na postojeće antigene.

3. Dijagnoza hepatitisa B pomoću PCR tehnike dizajnirane za otkrivanje HBV DNA u cirkulacijskom sustavu. Ako je rezultat pozitivan, onda osoba ima hepatitis. Analiza za HBV DNA naziva se kvalitativna. Tu je i kvantitativni PCR. Kvantitativna PCR pruža mogućnost identificiranja opterećenja uz prisutnost virusa hepatitisa. Što je virusno opterećenje? To je broj kopija HBV DNA u 1 ml krvi. Kvantitativna analiza hepatitisa pokazuje aktivnost virusa.

4. Test krvi za biokemiju. Ova analiza uključuje određivanje broja enzima koje proizvodi jetra. Takvi enzimi uključuju ALT, AST. Nalaze se unutar jetrenih stanica - hepatocita. Ako su stanice jetre oštećene, enzimi se oslobađaju i ulaze u krv. Pozitivna analiza razmatra se samo kada broj jetrenih enzima premašuje normu. Istraživanje pokazuje da li postoje upalni procesi u jetri i njihova aktivnost.

5. Ultrazvučni pregled, elastometrija itd. Dijagnoza hepatitisa može se provesti i ne-laboratorijskim metodama. Upotrebom ultrazvuka pregledavaju se organi abdomena. Ultrazvuk daje jasnu sliku u svakom upalnom procesu jetre i njezinih krvnih žila. Učinkovito provođenje elastometrije jetre. Metoda elastometrije daje ideju o stupnju fibroze u jetrenom tkivu.

6. Najvažnija analiza je prisutnost antigena hepatitisa B u masi crvenih krvnih zrnaca, a ako postoje, to ukazuje na prisutnost infekcije u ljudskom tijelu.

7. Laboratorijski tip dijagnoze hepatitisa uključuje određivanje antigena i antitijela u masi eritrocita. Najčešći HBsAg očituje se u cirkulacijskom sustavu čak iu inkubacijskom razdoblju hepatitisa. Osoba ne zna za razvoj svoje bolesti, au krvi se već događaju promjene. Kada je hepatitis akutan, HBsAg nestaje iz krvi. Obično HBsAg nije prisutan tijekom prvog mjeseca ikteričnog perioda, a antitijela na ovaj antigen počinju se pojavljivati ​​u cirkulacijskom sustavu 90 dana nakon infekcije.

Pozitivan test antitijela ne znači da osoba ima hepatitis. Moguće je da je prethodno bolovao od hepatitisa bez D-agensa. Ako nakon liječenja nema HBsAg u krvi pacijenta, ali postoje antitijela, to ukazuje na dobru prognozu koja pokazuje da se pacijent oporavlja. Ako pacijent ima kronični ili teški hepatitis, tada se antitijela mogu pojaviti već od prvih dana icteričnog razdoblja.

Pouzdan ekvivalent je anti-HBc IgM u krvi. Otkrivaju se na kraju predikteričkog razdoblja. Prisutni su cijelo razdoblje očitih manifestacija. Ako analiza sadrži anti-HBc IgM, to znači da se virus i dalje množi. Nakon početka oporavka, anti-HBc IgM nestaje. Akutna faza bolesti može proizvesti anti-HBc IgG test. Oni će biti otkriveni tijekom života osobe.

Kada se završi period inkubacije hepatitisa (posebno autoimune), HBeAg počinje se pojavljivati ​​u krvi. Informiraju o aktivnoj podjeli i povećanju zaraznih čestica. Čim se počne žućkasto razdoblje, NVAAg nestaje. Zamijenjen je s anti-HBe. Anti-HBe pokazuje da se aktivnost infekcije smanjuje i oporavak će uskoro doći. No, reprodukcija virusa ne prestaje!

Akutni hepatitis može postati kroničan. O tome će govoriti identificirani u krvi HVag. Ako je prisutan, to znači da je vjerojatnost transformacije procesa u kronični oblik visoka. Prisutnost HeVaga označava vrlo zaraznog pacijenta.

Mora se imati na umu da laboratorijska dijagnostika hepatitisa B, koja daje negativan rezultat za HBsAg, ne isključuje samu dijagnozu. Važan ključni element je prisutnost anti-HBc IgM u krvi. Ta će antitijela točno potvrditi bolest. Ako krvni test ne sadrži anti-HBc IgM, to može ukazivati ​​na prisutnost HBV-a, a prisutnost tih antitijela ukazuje na intenziviranje infekcije.

Detekcija DNA hepatitisa B

Najvažnija studija za određivanje prisutnosti virusne DNA je PCR. Analiza ukazuje na aktivnost infektivnog procesa. Ovom metodom možete saznati više o prognozi bolesti.

Ako je hepatitis povoljniji, onda HBV DNA nestaje iz krvi tijekom početnih razdoblja infekcije. Laboratorijska dijagnostika u obliku PCR-a daje podatke o kvaliteti liječenja (učinak određenog lijeka).

Da bi se razumjelo koje taktike treba poduzeti za imenovanje terapijskih mjera, potrebno je provesti kvantitativnu metodu PCR-a. Kvantitativna PCR dokazuje pozitivnu reakciju terapije.

Osnova za dijagnozu

Za odgovarajuću dijagnozu bit će potrebni sljedeći pregledi:

1. Dnevni pregled, palpacija.
2. Ultrazvuk jetre.
3. Biokemijska analiza krvi (ponavljano).
4. Pregled za HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, ukupni anti-HBc, HBV DNA.
5. Markeri HBV i HCV (virusni hepatitis je isključen).
6. Punkcija jetre.
7. Biopsija jetre. Pomoću posebne igle se probuši trbušni zid i ukloni mali komad jetre radi histološkog ispitivanja (komad ima veličinu ne veću od pola grama). Biopsija je najnovija metoda ispitivanja za hepatitis. Zahvaljujući njoj, možete najtočnije govoriti o stupnju aktivnosti infektivnog procesa, fibrozi jetre. Biopsija je kirurški postupak. To može dovesti do komplikacija, pa se često ne koristi za dijagnozu.
8. Fibroelastografiya. Može se koristiti za procjenu gustoće tkiva jetre. Tehnika je slična ultrazvuku. Studija koristi poseban senzor koji se instalira na kožu na mjestu projekcije jetre.
9. FibroTest. Temelji se na brojanju određenih krvnih slika.

Kronični hepatitis B

Faza kroničnog hepatitisa B:

Faza 1 - Replikacija virusa. Virus se množi s povećanom aktivnošću.

Faza 2 - integracija. Virus prestaje umnožavati. Virusni genom počinje se integrirati u DNK normalnih stanica jetre, hepatocita.

Da bi se odredila brzina napredovanja virusa, važno je razumjeti ozbiljnost procesa, ishod, stupanj poremećaja jetrenih stanica. Laboratorijska dijagnostika kroničnog hepatitisa temelji se na otkrivanju:

Ako je hepatitis HBeAg-pozitivan (pozitivna analiza), u masi eritrocita bit će:

• u fazi oplodnje - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (ukupno), HBV DNA;
• u stupnju insercije hepatocita u DNA - HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (ukupno), HBV DNA.

Ako je hepatitis seronegativan, tada će HBsAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNA biti prisutne u krvi. Štoviše, njihova prisutnost ni na koji način ne ovisi o fazi infektivnog procesa.

Diferencijalna dijagnostika

Prilikom postavljanja dijagnoze, liječnik je dužan razlikovati hepatitis B s drugim bolestima - hepatitisom A, C, E, D. Konačna dijagnoza može se napraviti tek nakon što se u krvi utvrde određeni markeri specifični za svaki hepatitis.

Hepatitis treba razlikovati od drugih važnih bolesti: akutnih respiratornih virusnih infekcija, žučnih kamenaca, trovanja hranom, crijevne infekcije, kirurške patologije trbušnih organa i mnogih drugih bolesti.

Autoimuni hepatitis

Za autoimuni hepatitis dijagnoza uključuje sljedeće najvažnije pretrage:

1. Analiza mase crvenih krvnih stanica (OAK). Objašnjenje: anemija (normocitična) u krvi opažena je kod autoimunog hepatitisa, smanjenog sadržaja leukocita, trombocita i povećanog ROE. Međutim, može se očekivati ​​veći stupanj anemije.
2. Urin. Dešifriranje analize mokraće: sadrži proteine, crvene krvne stanice, bilirubin.
3. Krvni test za biokemiju. Vrlo relevantna analiza. Tumačenje: povećana količina bilirubina, povećana arginaza, smanjenje albumina, povećanje γ-globulina i timolov test. Sublimatni test je smanjen. Neki pokazatelji mogu se povećati za 2 ili više puta. Ovo je pozitivan test za autoimuni hepatitis.
4. Imunološka analiza. Dekodiranje: smanjuju se supresori T-limfocita, pojavljuju se stanice lupusa u masi eritrocita, povećava se broj imunoglobulina, antitijela na eritrocite.

Pozitivan test za hepatitis može se otkriti putem serološke metode istraživanja. Autoimuni hepatitis je heterogena bolest.

ELISA za virusni hepatitis

9. ožujka 2017., 16:25 Stručni članci: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3.608

Da bi se otkrio virusni hepatitis u tijelu, lijek široko koristi imunološki test enzima koji se temelji na detekciji koncentracije i tipa antigena pomoću antitijela i enzima. Provodi se u fazama, laboratorijskim istraživanjima, s velikom točnošću indikacija. Ovisno o količini i klasi antitijela, boji i koncentraciji enzima koji koristi ELISA i, shodno tome, liječnik dijagnosticira bolest, promjene.

Što je ELISA?

Prisutnost virusnog hepatitisa u tijelu pacijenta određuje serološkom metodom analize krvi za prisutnost HCV virusa i markera (tijela i antitijela) koji to ukazuju. Enzimski imunosorbentni test (ELISA) ispituje različite viruse, spojeve niske molekularne mase, makromolekule, njihove kvalitativne i kvantitativne pokazatelje, koristeći manifestaciju reakcije na njihove antigene. Da biste to učinili, upotrijebite enzim kao oznaku za registraciju signala. Sve se češće koristi u medicini, jer ELISA jasno pronalazi dobro definirane antigene, ne miješajući ih s drugima, ima visoku osjetljivost na prisutnost invazije u virusnom hepatitisu.

Nedostatak takve dijagnoze je nemogućnost identificiranja uzroka bolesti, jer metoda samo ukazuje na reakciju imunološkog sustava u tijelu. Na rezultate analize utjecalo je ranije cijepljenje. 8 sati prije analize preporuča se suzdržavanje od jedenja, nikotina, alkohola. Osnova ELISA testa je enzimski i imuni odgovor organizma na virus. Biološke molekule se vežu za stanicu i njene elemente, mikroorganizme, detektiraju virus, a zatim djeluju enzimi koji vam omogućuju da izrazite imuni odgovor vidljivim i mjerljivim parametrom.

Indikacije za analizu

Virusni hepatitis u tijelu može uzrokovati rak i cirozu jetre. Važnost pravodobne dijagnoze je neosporna. Primarna metoda dijagnostike je ELISA test, koji s velikom točnošću određuje prisutnost HCV virusa (IgM i IgG) i aktivnost njegovih elemenata u tragovima. Obvezni testovi za prolazak virusnog hepatitisa:

1. Osobe s rizičnim skupinama (ovisnici o drogama, osobe oboljele od AIDS-a, zaposlenici u zdravstvenim ustanovama i ustanovama za provedbu zakona).
2. Osobe s akutnim ili kroničnim hepatitisom.
3. Trudnice i žene koje planiraju trudnoću.

ELISA prepoznaje bolest u bilo kojoj fazi. Rezultati analize u prosjeku su spremni za 2 dana.

Kriteriji koji određuju važnost analize

ELISA test određuje prisutnost protutijela klase IgG, IgM, IgA. Kod dijagnosticiranja virusnog hepatitisa, liječnik ne obraća pažnju na njihov tip, budući da prisutnost bilo koje takve manifestacije HCV virusa već ukazuje na akutni ili kronični stadij bolesti. U ranim stadijima bolesti, razina IgM-a raste (5 dana nakon infekcije); na 15. - 20. dan pojavljuju se IgG antitijela i mogu ostati u ljudskoj krvi dugo vremena čak i nakon izlječenja; IgA se pojavljuje nakon 10-14 dana, smanjuje se nakon tretmana.

Ako se IgG i IgA otkriju nakon primjene lijekova i njihova razina ostaje na istoj stopi - nosilac ima kronični oblik hepatitisa. Važan kriterij testa bit će jasna definicija klase dostupnih antitijela i njihove količine. Na temelju toga možete znati ne samo o prisutnosti bolesti, već io stupnju njezina razvoja. Otkrivanje takvih elemenata u krvi pacijenta omogućuje propisivanje pravilnog i pravovremenog liječenja kako bi se spriječile ozbiljnije posljedice.

Kako se to radi?

Dodijelite izravni, a ne izravni ELISA test. Izravni stupnjevi:

1. Skupljajući biološki materijal i stavljajući ga u posebne rupe.
2. Unutar 15-30 minuta antigeni su vezani na površinu jažica.
3. Dodavanje antitijela u jažice na pronađeni antigen. Sve je ostalo na 1-5 sati.
4. Uklonite nevezane antigene (sipajte sadržaj jažica).
5. Isperite jažice posebnom otopinom.
6. Dodajte otopinu enzima u jažice. Ostavite 30 minuta - 1 sat.
7. Korištenje kolorimetrije (detekcija boje i koncentracije boje sadržaja u bušotini, usporedba s pokazateljima koji su izravno proporcionalni koncentraciji virusa).

Upotreba za dijagnozu neizravne ELISA-e daje točniji rezultat.

Indirektna ELISA metoda provodi se uporabom neobilježenih antitijela za pronađene antigene i naknadnim dodavanjem obilježenih antitijela. Prvo, krv se uzima od pacijenta i širi se kroz bunare 15-30 minuta. (antitijela su fiksirana s rupama). Tada se u njih unose neoznačena antitijela 1 do 5 sati (formira se veza antigena s antigenima - imunološki kompleks). Zatim se iz jažica izlije nevezani mikroelementi i ispere posebnom otopinom. U sljedećoj fazi laboratorijski tehničar dodaje obilježene elemente u tragove u jažice 15-30 minuta. (ovo se veže neoznačeno s obilježenim s formiranjem kompleksa "antitijelo-antitijelo-antigen"). Ekstra (labavo) se ponovno uklanja tijekom pražnjenja i pranja otopinom. Sljedeći je enzim koji mijenja boju za 5-30 minuta. ostaci u rupama i podaci o boji uspoređeni su s podacima pokazatelja tablice. Indirektna ELISA je točnija.

Što pokazuje ELISA za virusni hepatitis?

ELISA omogućuje otkrivanje prisutnosti infekcije (virusi hepatitisa svih vrsta, HIV, herpes, sifilis, citomegalovirus, ospice, rubeola, virus mumpsa, Epstein-Barr virus), je marker autoimunih bolesti, stanica raka. Ukazuje na kršenje reproduktivnih funkcija (promjene u testosteronu, prolaktinu, estradiolu i progesteronu), nefunkcioniranju štitnjače, infestaciji helmintima, klamidiji. Učinkovit za otkrivanje ureaplasmoze, hripavca, virusa Dange, virusa Zapadnog Nila, Borrelia. Popis definicija je visok, uključuje mnoge stavke.

Potvrda rezultata

Određivanje antigena HCV virusa ELISA-om daje točnost od 98%. Također se koristi za ponovno ispitivanje biološkog materijala s neizrazitim prethodnim pokazateljima. Prisutnost IgM antigena nije pokazatelj akutnog hepatitisa i zahtijeva dodatna istraživanja. Kada se ELISA test ponovi, rezultati se podudaraju za 90-100%. U slučaju minimalnog odstupanja, kao indikator uzima se prosječna vrijednost. Za maksimalnu točnost u smislu liječnika savjetuju paralelno s provođenjem biokemijske analize krvi. Za testiranje rezultata nakon enzimskog imunološkog testa možete koristiti druge dijagnostičke metode.

Studije o virusu hepatitisa B (ELISA i PCR)

Antigen hepatitis B virusa (HBsAg)

Površinski antigen hepatitisa B u serumu je normalno odsutan.
Detekcija površinskog antigena hepatitisa B (HBsAg) u serumu potvrđuje akutnu ili kroničnu infekciju virusom hepatitisa B.

U akutnoj bolesti, HBsAg se detektira u serumu u posljednjih 1-2 tjedna inkubacijskog razdoblja i prvih 2-3 tjedna kliničkog razdoblja. Kruženje HBsAg-a u krvi može biti ograničeno na nekoliko dana, tako da biste trebali težiti ranom početnom pregledu pacijenata. Metoda ELISA omogućuje otkrivanje HBsAg u više od 90% bolesnika. Gotovo u 5% bolesnika, najosjetljivije metode istraživanja ne otkrivaju HBsAg, u tim slučajevima etiologiju virusnog hepatitisa B potvrđuje prisutnost anti-HBcAg JgM ili PCR.

Koncentracija HBsAg u serumu u svim oblicima ozbiljnosti hepatitisa B u visini bolesti ima značajan raspon fluktuacija, međutim, postoji određeni obrazac: u akutnom razdoblju postoji inverzni odnos između koncentracije HBsAg u serumu i ozbiljnosti bolesti.

Visoke koncentracije HBsAg češće su u blagim i umjerenim oblicima bolesti. U teškim i zloćudnim oblicima koncentracija HBsAg u krvi je često niska, a kod 20% bolesnika s teškim oblikom i 30% s malignim antigenom u krvi uopće se ne može otkriti. Pojava na toj pozadini u bolesnika s antitijelima na HBsAg smatra se nepovoljnim dijagnostičkim znakom; određuje se u malignim oblicima hepatitisa B.

U akutnom tijeku hepatitisa B koncentracija HBsAg u krvi postupno se smanjuje do potpunog nestanka ovog antigena. HBsAg nestaje kod većine bolesnika unutar 3 mjeseca od početka akutne infekcije.

Smanjenje koncentracije HBsAg za više od 50% do kraja trećeg tjedna akutnog razdoblja, u pravilu, ukazuje na bliski završetak procesa infekcije. Obično se u bolesnika s visokom koncentracijom HBsAg u visini bolesti otkriva u krvi nekoliko mjeseci.
U bolesnika s niskim koncentracijama HBsAg nestaje mnogo ranije (ponekad nekoliko dana nakon početka bolesti). Općenito, vrijeme detekcije HBsAg se kreće od nekoliko dana do 4-5 mjeseci. Maksimalno razdoblje otkrivanja HBsAg s glatkim tijekom akutnog hepatitisa B ne prelazi 6 mjeseci od početka bolesti.

HBsAg se može naći u zdravih ljudi, u pravilu, u profilaktičkim ili slučajnim studijama. U takvim slučajevima pregledavaju se drugi markeri virusnog hepatitisa B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg i istražuje se funkcija jetre.

U slučaju negativnih rezultata, potrebna su ponavljana ispitivanja na HBsAg.
Ako se ponovljenim krvnim testovima tijekom više od 3 mjeseca otkriju HBsAg, taj je pacijent klasificiran kao kronični bolesnik s virusnim hepatitisom B.
Prisutnost HBsAg je vrlo česta. U svijetu ima više od 300 milijuna prijevoznika, au našoj zemlji ima oko 10 milijuna prijevoznika.
Prestanak HBsAg cirkulacije i naknadna serokonverzija (stvaranje anti-HBs) uvijek ukazuje na sanaciju tijela.

Test krvi na prisutnost HBsAg koristi se u sljedeće svrhe:

za dijagnozu akutnog hepatitisa B:

• razdoblje inkubacije;
• akutna bolest;
• rani oporavak;
  

za dijagnozu kroničnog virusnog hepatitisa B;

za bolesti:

• uporni kronični hepatitis;
• ciroza jetre;

za pregled i identifikaciju pacijenata u rizičnim skupinama:

bolesnika s čestim hemotransfuzijama;

bolesnika s kroničnim zatajenjem bubrega;

bolesnika s višestrukom hemodijalizom;

bolesnika sa stanjem imunodeficijencije, uključujući AIDS.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultati istraživanja izraženi su kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsustvo HBsAg u serumu. Pozitivan rezultat - identifikacija HBsAg ukazuje na inkubaciju ili akutno razdoblje akutnog virusnog hepatitisa B, kao i na kronični virusni hepatitis B.

Antitijela na nuklearni antigen virusa hepatitisa B JgG (anti-HBcAg JgG)

Normalno, serumski anti-HBcAg nije prisutan u serumu.
U bolesnika s anti-HBcAg JgG pojavljuju se u akutnom razdoblju virusnog hepatitisa B i traju tijekom cijelog života. Anti-HBcAg JgG je vodeći marker prenesenog HBV.

Testovi krvi za anti-HBcAg JgG se koriste za dijagnosticiranje:

kronični virusni hepatitis B u prisutnosti HBs antigena u serumu;

virusni hepatitis B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost serumskog anti-HBcAg JgG. Pozitivan rezultat - identifikacija anti-HBcAg JgG ukazuje na akutnu infekciju, oporavak ili ranije preneseni virusni hepatitis B.

Antigen antitijela "e" virusa hepatitisa B (HBeAg)

Normalno, HBeAg u serumu je odsutan.
HBeAg se može naći u serumu većine bolesnika s akutnim virusnim hepatitisom B. Obično nestaje u krvi prije HBs antigena. Visoka razina HBeAg u prvim tjednima bolesti ili njeno otkrivanje više od 8 tjedana daje razlog za sumnju na kroničnu infekciju.

Taj se antigen često otkriva u kroničnom aktivnom hepatitisu virusne etiologije. Od posebnog interesa u definiciji HBeAg je činjenica da njegova detekcija karakterizira aktivnu replikativnu fazu infektivnog procesa. Utvrđeno je da visoke koncentracije HBeAg odgovaraju visokoj aktivnosti DNA polimeraze i karakteriziraju aktivnu replikaciju virusa.

Prisustvo HBeAg u krvi ukazuje na njegovu visoku infektivnost, tj. ispituje se prisutnost aktivne infekcije hepatitisom B u tijelu, a detektira se samo u prisutnosti HBs antigena u krvi. U bolesnika s kroničnim aktivnim hepatitisom, antivirusni lijekovi koriste se samo kada je HBeAg detektiran u krvi. HBeAg - antigen - marker akutne faze i replikacije virusa hepatitisa B.

Za dijagnosticiranje koristi se test krvi na prisutnost antigena HBe:

period inkubacije virusnog hepatitisa B;

prodromalno razdoblje virusnog hepatitisa B;

akutno razdoblje virusnog hepatitisa B;

kronični perzistentni virusni hepatitis B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost HBeAg u serumu. Pozitivan rezultat - otkrivanje HBeAg ukazuje na inkubaciju ili akutno razdoblje akutnog virusnog hepatitisa B ili na kontinuiranu replikaciju virusa i infektivnost pacijenta.

Antitijela na antigen "e" virusa hepatitisa B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg u serumu je normalno odsutan. Pojava anti-HBeAg protutijela obično ukazuje na intenzivno uklanjanje virusa hepatitisa B i manje infekcije pacijenta.

Ta se antitijela pojavljuju u akutnom razdoblju i traju do 5 godina nakon infekcije. Kod kroničnog perzistentnog hepatitisa, anti-HBeAg nalazi se u krvi bolesnika zajedno s HBsAg. Serokonverzija, tj. prijelaz HBeAg na anti-HBeAg, s kroničnim aktivnim hepatitisom, češće prognostički povoljnim, ali ista serokonverzija ne poboljšava prognozu ozbiljne cirotične transformacije jetre.

Testovi krvi na prisutnost anti-HBeAg koriste se u sljedećim slučajevima u dijagnostici virusnog hepatitisa B:

utvrđivanje početnog stupnja bolesti;

akutna infekcija;

rani oporavak;

oporavak;

kasna faza oporavka.

dijagnoza nedavno prenesenog virusnog hepatitisa B;

dijagnoza kroničnog perzistentnog virusnog hepatitisa B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost antitijela na HBeAg u serumu. Pozitivan rezultat je otkrivanje antitijela na HBeAg, što može ukazivati ​​na početni stadij akutnog virusnog hepatitisa B, akutno razdoblje infekcije, rani stadij oporavka, oporavak, nedavno prenijeti virusni hepatitis B ili perzistentni virusni hepatitis B.

Kriteriji za prisutnost kroničnog hepatitisa B su:

otkrivanje ili periodično otkrivanje HBV DNA u krvi;

kontinuirano ili povremeno povećanje aktivnosti ALT / AST u krvi; t

morfološki znakovi kroničnog hepatitisa u histološkom ispitivanju biopsije jetre.

Detekcija virusa hepatitisa B PCR-om (kvalitativno)

Virus hepatitisa B u krvi je obično odsutan.
Kvalitativno određivanje virusa hepatitisa B metodom PCR u krvi omogućuje potvrđivanje prisutnosti virusa u tijelu pacijenta i time utvrđuje etiologiju bolesti.

Ova studija pruža korisne informacije za dijagnozu akutnog virusnog hepatitisa B u inkubacijskim i ranim razvojnim stadijima bolesti, kada glavni pacijenti mogu biti odsutni. Serumska virusna DNA detektirana je u 50% bolesnika u odsutnosti HBeAg. Analitička osjetljivost PCR metode je ne manje od 80 virusnih čestica u 5 μl, posljednji DNK uzorak, specifičnost - 98%.

Ova metoda je važna za dijagnosticiranje i praćenje tijeka kroničnog HBV-a. Oko 5-10% slučajeva ciroze i drugih kroničnih bolesti jetre uzrokovano je kroničnim nositeljem virusa hepatitisa B. Markeri aktivnosti takvih bolesti su prisutnost HBeAg i DNA virusa hepatitisa B u krvi.

Metoda PCR omogućuje određivanje DNK virusa hepatitisa B u krvi i kvalitativno i kvantitativno. Određeni fragment u oba slučaja je jedinstveni DNA slijed gena strukturnog proteina virusa hepatitisa B.

Detekcija DNA virusa hepatitisa B u biomaterijalu pomoću PCR-a neophodna je za:

razlučivanje upitnih rezultata seroloških testova;

otkrivanje akutnog stadija bolesti u usporedbi s prethodnom infekcijom ili kontaktom;

kontrolirati učinkovitost antivirusnog liječenja.

Nestanak hepatitis B DNA iz krvi znak je učinkovitosti terapije

Detekcija virusa hepatitisa B PCR-om (kvantitativno)

Ova metoda daje važne informacije o intenzitetu razvoja bolesti, učinkovitosti liječenja i razvoju otpornosti na aktivne lijekove.
Za dijagnozu virusnog hepatitisa PCR-om u serumu koriste se testni sustavi čija je osjetljivost 50-100 primjeraka u uzorku, što omogućuje detekciju virusa u koncentraciji od 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopije / ml. PCR u virusnom hepatitisu B je svakako neophodan za procjenu virusne replikacije.

Serumska virusna DNA detektirana je u 50% bolesnika u odsutnosti HBeAg. Serum krvi, limfociti i hepatobiopsija mogu poslužiti kao materijal za otkrivanje DNA virusa hepatitisa B.

• Ocjena razine viremije je sljedeća:
• manje od 2.10 ^ 5 kopija / ml (manje od 2.10 ^ 5 IU / ml) - niska viremija;
• od 2.10 ^ 5 kopija / ml (2.10 ^ 5 IU / ml) do 2.10 ^ 6 kopija / ml (8.10 ^ 5 IU / ml) - srednja viremija;
• više od 2,10 ^ 6 kopija / ml - visoka viremija.

Postoji veza između ishoda akutnog virusnog hepatitisa B i koncentracije HBV DNA u krvi pacijenta. Uz nisku razinu viremije, proces kroničenja infekcije je blizu nule, s prosječnim, proces je kroničen u 25-30% bolesnika, a uz visoku razinu viremije, akutni virusni hepatitis B najčešće postaje kroničan.

Indikacije za liječenje kroničnog HBV interferona alfa treba uzeti u obzir kao prisutnost biljega aktivne virusne replikacije (otkrivanje HBV HBV, HBeAg i HBV DNA u krvnom serumu tijekom prethodnih 6 mjeseci).

Kriteriji za procjenu učinkovitosti liječenja su nestanak HBEAg i HBV DNA u krvi, što je obično popraćeno normalizacijom razine transaminaza i dugoročnom remisijom bolesti, HBV DNA nestaje iz krvi do 5. mjeseca liječenja u 80% bolesnika. Smanjenje razine viremije za 85% ili više do trećeg dana od početka liječenja u usporedbi s početnim je brz i prilično točan kriterij za predviđanje učinkovitosti terapije.

Istraživanje virusnog hepatitisa metodom ife

ELISA u dijagnostici virusnog hepatitisa. Mogućnosti enzimskih imunotestova

Specifična laboratorijska dijagnostika virusnog hepatitisa temelji se na primjeni imunokemijskih i molekularno-bioloških metoda istraživanja. Glavne imunokemijske metode su radioizotop ili radioimunska (RIA) i imunoanaliza (ELISA). Imunokemijske dijagnostičke metode temelje se na specifičnoj interakciji antigena - antitijela s naknadnom identifikacijom kompleksa uz pomoć posebnih oznaka. Najčešći imunološki test enzima.

Prva su izvješća o uporabi enzimskog imunotestova. kao metoda za određivanje tvari objavljene su 1971. godine istovremeno dvije istraživačke skupine - V. Van Weemen, A. Schuurs i E. Engvall, P. Perlmann. Enzimski imunološki test temelji se na sljedećem principu: na krutoj fazi, koja uglavnom koristi površinu jažica polistirenske tablete, fiksiran je antigen infektivnog agensa ili antitijela (često mješavina antitijela) s antigenima. Taj antigen ili antitijela, koja su fiksirana na krutoj fazi, nazivaju se imunosorbenti.

Kao rezultat inkubacije imunosorbenta i test seruma u prisutnosti detektabilnog agensa, oni su vezani za kompleks antigen - antitijelo. Nakon postupka pranja, tijekom kojeg se uklanjaju nevezani antigeni i antitijela, provodi se inkubacija s konjugatom. Kao konjugat za detekciju HBsAg, koriste se anti-HBs, u otkrivanju antitijela na virus hepatitisa C - antitijela na humane imunoglobuline (antivirusni konjugat) obilježeni peroksidazom iz hrena. Kao rezultat ove inkubacije dolazi do vezanja na već postojeće antigenske komplekse - antitijelo dodatno uvedenog konjugata. Nakon uklanjanja nevezanog konjugata (ispiranje), supstrat se uvodi u jažice. Kada se koristi konjugat peroksidaze, vodikov peroksid se koristi kao supstrat u kombinaciji s indikatorom, koji se najčešće koristi kao ortofenilendiamin (OPD) ili tetrametilbenzidin (TMB). Rezultat se procjenjuje fotometrijski.

Kvaliteta i pouzdanost analitičkih sposobnosti enzimske imunotestove karakterizira niz kriterija koji uključuju osjetljivost, specifičnost, točnost i obnovljivost.

Osjetljivost je minimalna količina tvari koja se može otkriti imunoanalizom enzima. U ovom slučaju, donja granica osjetljivosti ove metode je koncentracija ispitivane tvari u uzorku, koja odgovara najmanjoj pozitivnoj vrijednosti određivanja, koja je statistički značajno različita od pokazatelja namjerno negativnih uzoraka. Osjetljivost IFTS-a ovisi o brojnim okolnostima koje se odnose i na dizajn testnog sustava (afinitet imunosorbenta, kvalitetu ekstrakcijskog i pufernog sustava), te na razlučivost i točnost metode registracije.

Specifičnost - sposobnost da se točno identificiraju komponente za određivanje kojih je ovaj enzimski imunološki test namijenjen. Specifičnost ELISA određuje se u velikoj mjeri unakrsnom reakcijom antitijela ili antigena (tj. Sastav koji se koristi kao imunosorbent) s blisko povezanim spojevima, kao i sastav inkubacijskog medija (efekt matrice).

Točnost - podudarnost prosječne vrijednosti rezultata ponovljenih određivanja istog kontrolnog uzorka s pravom vrijednošću izmjerenog parametra. Točnost određivanja u ELISA-u ovisi o kvaliteti testnog sustava i kontrolnog uzorka. Za dobre imunološke testne sustave, pokazatelji ispravnosti su u rasponu od 90-110%. Posebnost biomedicinskih istraživanja u ELISA-i je nemogućnost utvrđivanja točne vrijednosti, pa se kao prava vrijednost uzima prosjek nekoliko stručnih laboratorija. Statistički kriterij za točnost je aritmetički prosjek i stupanj njegovog odstupanja od stvarne vrijednosti, izražen kao postotak.

Ponovljivost - sposobnost testnog sustava da pokaže iste vrijednosti s ponovljenim ispitivanjima istog uzorka. Reproduktivnost ovisi o nasumičnim pogreškama (pogreškama) tijekom postupka postavljanja reakcije, te o kvaliteti ispitnih sustava i točnosti metode bilježenja rezultata. Vjeruje se da reproduktivnost istih kontrolnih uzoraka iste tvrtke u različitim laboratorijima ne smije prelaziti vrijednost koeficijenta varijacije od 15%.

Postoji nekoliko specifičnih ELISA shema za određivanje markera virusnog hepatitisa: a) imunoanaliza direktnog enzima; b) indirektni enzimski imunotest; c) kompetitivnu inhibiciju; c) metodu “zamke” ili “hvatanje”.

Od molekularno bioloških metoda za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa, češće se koriste polimeraza lančana reakcija i hibridizacija. Ove metode, posebice PCR, omogućuju otkrivanje vrlo malih količina specifične virusne DNA ili RNA i, stoga, procjenu replikacije, au nekim slučajevima i replikacijske aktivnosti.

Test krvi na hepatitis C

Hepatitis C je jedna od najčešćih bolesti jetre koja se javlja kada je zaražena virusom hepatitisa C (HCV), koji ulazi u tijelo prije svega kada dođe u kontakt s krvlju zaražene osobe. Nalazi se kod kroničnog i akutnog hepatitisa C. U 70-80 posto bolesnika s akutnim hepatitisom C nema simptoma bolesti, samo u nekim slučajevima, nakon nekog vremena nakon infekcije, javljaju se manifestacije bolesti koje se izražavaju umorom, bolovima u trbuhu, gubitkom apetita, zamračenjem. mokraća, povraćanje, mučnina, munjeviti izmet, žutica, bol u zglobovima. U pravilu, simptomi se javljaju 6-7 tjedana nakon infekcije, ali trajanje pojave znakova bolesti varira od 2 tjedna do 6 mjeseci. Ako se gore navedeni simptomi pojave, trebate konzultirati liječnika za zarazne bolesti i napraviti test krvi za hepatitis C. Dijagnoza hepatitisa, provedena na vrijeme, može otkriti bolest u ranim fazama i značajno povećati šanse za oporavak.

Kada je zakazan test na hepatitis C

Situacije kada je potreban test na hepatitis C:

• tijekom trudnoće i planiranja obitelji;
• bolesnika sa simptomima kroničnog ili akutnog hepatitisa;
• osoba je u opasnosti. To su medicinski radnici, osobe u zatvoru, policijski službenici, ljudi koji koriste droge, imaju veliki broj seksualnih partnera, imaju AIDS, nalaze se na hemodijalizi i drugi.

Priprema za analizu hepatitisa C

Posebna priprema za analizu hepatitisa C nije potrebna. Za analizu, krv se uzima iz vene na prazan želudac, a istovremeno treba proći najmanje osam sati nakon posljednjeg obroka.

Testovi hepatitisa C ELISA

Prva analiza, obično propisana za dijagnozu hepatitisa C - ELISA test (enzimski imunosorbentni test). Testovi hepatitisa C ELISA omogućuju otkrivanje prisutnosti antitijela na virus hepatitisa C (anti-HCVAb) u krvi. Ako je rezultat ELISA testa pozitivan, to ukazuje na prisutnost kontakta tijela s virusom hepatitisa C. Ali 40% osoba koje imaju pozitivan ELISA test ne detektira virus u krvi. Ovaj fenomen naziva se lažno pozitivnim rezultatom. Također, uz pomoć ELISA-e, provjeri se donorska krv.

RIBA za hepatitis C

RIBA analiza za hepatitis C koristi se za potvrdu pozitivnog ELISA rezultata. Metoda rekombinantnog imunoblotinga (RIBA) je točnija studija prisutnosti antitijela na virus hepatitisa C. Prisutnost virusa hepatitisa C u tijelu također ne određuje pozitivan rezultat, već samo potvrđuje prisutnost antitijela.

Testovi hepatitisa C PCR

Kako bi se otkrila prisutnost virusa hepatitisa C u krvi (HCV RNA) i postavila dijagnoza, najčešće se rabi analiza metodom lančane reakcije polimeraze (PCR). Ova studija omogućuje da se s velikom točnošću otkriju prisutnost u krvi čak i male količine virusa. PCR analiza za hepatitis C može otkriti prisutnost virusa već 5 dana nakon infekcije, mnogo prije pojave antitijela. Kada je rezultat PCR analize pozitivan, to znači prisutnost aktivne infekcije.

Postoje takve varijacije PCR analize:

• kvantitativni PCR, koji omogućuje utvrđivanje ne samo činjenice prisutnosti virusa, već i virusnog opterećenja (količine virusa). Ovaj pokazatelj je od velike važnosti za određivanje učinkovitosti liječenja;
• genotipizacija kojom se utvrđuje genotip virusa hepatitisa C, što je važno za određivanje trajanja i taktike liječenja. Postoji više od 10 genotipova virusa hepatitisa C, ali za kliničku praksu dovoljno je definirati pet najčešćih tipova: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Provedena je kvantitativna PCR analiza:

• s kvalitativnim pozitivnim testom na prisutnost RNA virusa hepatitisa C u serumu;
• za točnu procjenu učinkovitosti liječenja;
• odrediti taktiku liječenja pacijenta.

Ne postoji izravna veza između težine hepatitisa C i količine virusa u krvi. Koncentracija virusa utječe na infektivnost bolesti, to jest, što je veća količina virusa u krvi pacijenta, to je veći rizik od prijenosa virusa, na primjer, putem seksualnog kontakta ili s majke na dijete. Također, učinkovitost liječenja ovisi o koncentraciji virusa. Tijekom terapije povoljan faktor je nisko virusno opterećenje, a vrlo visoka je nepovoljna.

Urađena je analiza genotipova:

• s kvalitativnim pozitivnim testom na prisutnost RNA virusa hepatitisa C u serumu;
• za točnu procjenu učinkovitosti liječenja;
• odrediti taktiku liječenja pacijenta;
• predvidjeti kroničnost infektivnog procesa;
• odrediti progresiju bolesti.

Otkrivanje genotipa virusa je od velike važnosti za određivanje trajanja liječenja, što je važno, budući da interferon ima širok raspon nuspojava i nisku toleranciju za pacijenta.

Analiza dekodiranja hepatitisa C

Normalno, virusna RNA, antitijela na njih i antigeni su potpuno odsutni. Prisutnost protutijela u krvi ukazuje na prisutnost kroničnog ili akutnog hepatitisa C ili razdoblje oporavka. Ako je HCV RNA prisutna u krvi, koja je određena PCR analizom, to ukazuje na prisutnost virusa u krvi.

Uz pogrešnu tehniku ​​testiranja, transport i abnormalnosti krvi, PCR analiza ponekad može pokazati lažno pozitivne rezultate. Analize ELISA i RIBA u ranim stadijima bolesti, kada tijelo još nije proizvelo dovoljnu količinu antitijela, mogu pokazati lažno negativan rezultat.

Ako se kod dešifriranja testa na hepatitis C dobiju pozitivni rezultati, potrebno je kontaktirati liječnika za infektivne bolesti i gastroenterologa radi daljnje dijagnoze i liječenja.

Smanjili su se segmentirani neutrofili

Dječji trombociti su normalni, povišeni, spušteni

TGT stimulirajući štitnjaču

Dijagnoza hepatitisa

Ne može se odmah utvrditi prisutnost hepatitisa u tijelu, jer razdoblje inkubacije bolesti može trajati do četiri tjedna. Kada se pojave prvi znaci bolesti, u zahvaćenom organizmu javljaju se radikalne promjene u sastavu krvi: biokemijska analiza pokazuje ozbiljan zdravstveni problem i prisutnost patogenog virusa. Međutim, da bismo postavili konačnu dijagnozu, nije dovoljno donirati krv za hepatitis, kao i detaljnu dijagnozu hepatitisa.

Laboratorijska dijagnostika hepatitisa

Poželjno je izvršiti ga nakon završetka perioda inkubacije, tako da liječnik s najvećom preciznošću može odrediti bolest jetre prisutnu u tijelu. Inače, propisano liječenje neće dati željeni terapeutski učinak i čak pogoršati preovladavajuću kliničku sliku.

Dijagnoza hepatitisa A

Tipično, dijagnoza hepatitisa A započinje detaljnim ispitivanjem pacijenta i imenovanjem niza testova koji se moraju provesti što je prije moguće. Ovo je:

• biokemijski test krvi;
• potpuna krvna slika;
• PCR metoda;
• ELISA;
• koagulacije.

Ako Botkinova bolest napreduje, onda se prema rezultatima biokemijske analize krvi promatra abnormalan skok bilirubina, AlAT i AsAT, uzorka timola. Štoviše, nastaju specifični anti-HAV IgM, koji su nepobitna činjenica prisutnosti hepatitisa A.
Općenito, analiza krvi određena je padom leukocita, skokom ESR-a i limfocitozom. Ipak, najpouzdanija je PCR metoda koja određuje indikator RNA patogenog virusa.
Osim toga, liječnik proučava simptome bolesti, nakon čega može napraviti konačnu dijagnozu i prijeći na najučinkovitiju terapiju. Potreba za instrumentalnim pregledom je iznimno rijetka. Nakon uspješnog konzervativnog liječenja u uvjetima hospitalizacije i karantene bolesnika, očekuje se konačni oporavak, a hepatitis A se ne ponavlja.

Dijagnoza hepatitisa B

Utvrđivanje prisutnosti virusa hepatitisa B je također moguće prema rezultatima laboratorijskih ispitivanja, a za to je prvo potrebno donirati krv za hepatitis. Po prirodi, patogeni virus ima tri glavna antigena - HBsAg, HBcAg i HBeAg, kojima se u tijelu proizvode antitijela. Glavna značajka ove kliničke slike je ELISA - ELISA, koji samo otkriva specifične markere hepatitisa B.
Odmah bi trebalo pojasniti da se antigen HBsAg pojavljuje u krvi čak i prije prvih simptoma hepatitisa i da se pouzdano utvrdi u ikteričnom razdoblju. Međutim, negativni test ne isključuje prisutnost hepatitisa B i stoga zahtijeva uporabu jednako učinkovite metode lančane reakcije polimeraze (PCR).
Ako sumnjate da je hepatitis B obavezan je biokemijski test krvi koji se preporučuje proći na prvom mjestu. O pojedinačnoj raspravi se radi o biopsiji jetre i ultrazvuku peritonealnih organa, ali kada je povijest bolesti vrlo jasna, nema potrebe za metodama kliničkog ispitivanja.

Ehogram jetre kod autoimunog hepatitisa u stadiju kroničnog hepatitisa

Dijagnoza hepatitisa C

Da bi se postavila ta dijagnoza, nije dovoljno donirati krv za hepatitis, jer virus može prevladati u tijelu u latentnom obliku. Ipak, glavni laboratorijski testovi su sve gore navedene analize, kao i dodatna izvedba biopsije jetre. Ovo mikroskopsko ispitivanje biološkog materijala (u našem slučaju, dio jetrenog tkiva) određuje opseg patološkog procesa i tkivne fibroze. Uzorkovanje materijala provodi se pod lokalnom anestezijom, komplikacije ovakvog postupka su iznimno rijetke u medicinskoj praksi.
Ako se sumnja na hepatitis C, glavna metoda kliničkog pregleda je ultrazvuk peritonealnih organa. Razlog je jednostavan: bolest se često manifestira vizualnom promjenom zahvaćene jetre, promjenama u njezinoj strukturi i veličini. Na taj način možete odrediti:

• veličina jetre, slezene, gušterače i žučnog mjehura;
• patološke promjene u tim organima;
• opći protok krvi u peritonealnim organima;
• optimalno područje za izvođenje biopsije jetre.

Ova metoda kliničkog pregleda određuje sve fokalne patologije organa na mikroskopskoj razini. Ako je jetra zastupljena na ekranu u sivoj skali, potrebna je trenutna biopsija, jer siva boja vizualizira zahvaćena tkiva "ljudskog filtra".

Prevencija hepatitisa

Budući da se bolest ne manifestira odmah, daleko je od svih kliničkih slika koje se nastavljaju na trenutno liječenje. Pacijent jednostavno ne može biti svjestan postojanja patogenog virusa u tijelu, koji se potom brzo širi u krvotok i inficira zdrave stanice jetre.
Kako bi se izbjegla takva tragična sudbina, preporuča se poštivanje svih preventivnih mjera. Takva budnost će značajno smanjiti rizik obolijevanja i spasiti vas od ozbiljnih zdravstvenih problema u budućnosti. Osnovna pravila prevencije prikazana su u nastavku:

• operi ruke iza ulice;
• podvrgnuti visokokvalitetnoj preradi svježeg povrća i voća;
• provesti sva preventivna cijepljenja navedena u godišnjem kalendarskom planu;
• selektivan odnos prema seksualnim partnerima;
• izbjegavati kontakt s bolesnim ljudima;
• koristite samo šprice za jednokratnu upotrebu i budite posebno oprezni na postajama za transfuziju krvi.

Također se preporučuje da se redovito (jednom svakih šest mjeseci) daje krv za hepatitis, kako bi se osiguralo da virus ne prodire u tijelo, te ne inficira zdrave stanice jetre. Ako se utvrdi dijagnoza, potrebno je odmah postati dispanzer i slijediti sve preporuke stručnjaka.

Autor publikacije:
Syropyatov Sergej Nikolajevič
Obrazovanje: Državno medicinsko sveučilište u Rostovu (Državno medicinsko sveučilište u Rostovu), Odjel za gastroenterologiju i endoskopiju.
gastroenterolog
Doktor medicinskih znanosti