PCR dijagnostika za hepatitis C

Hepatitis C je upala stanica jetre koja nastaje kao posljedica infekcije HCV virusom (hepatitis C) putem kontakta s krvlju zaražene osobe. Genetski kod flavivirusa HCV nosi RNA (ribonuklenska kiselina) molekula sadržana u strukturi virusa. Ovaj fenomen opasan po život odlikuje se tajnošću u početnoj fazi patologije. Vremenski interval između infekcije i pojave simptoma (odgovor imunološkog sustava) može biti od jednog mjeseca do šest mjeseci. U pravilu, bolest ima kronični oblik i teško ju je izliječiti.

Moderna medicina omogućuje dijagnosticiranje patologije s manjim oštećenjem jetre. Najčešće i učinkovite dijagnostičke metode uključuju PCR analizu. Razmotrite u ovom članku što je to i koje vrste postoje.

Što je studija

PCR analiza za hepatitis C je laboratorijsko ispitivanje koje otkriva flavirus, genetski materijal ribonuklelenske kiseline (RNA). Određuje broj molekula RNA u krvi, kvalitetu biološkog materijala, genetski tip HCV flavirusa.

PCR metoda za hepatitis C omogućuje detektiranje minimalne količine flavirusa prije formiranja antitijela, u pravilu, ubrzo nakon infekcije.

Studija se često naziva RNA analizom, jer detektira čestice ribonukleinske kiseline veličine od 30-60 nm sadržane u flavavirusu.

Studija se provodi na sljedeći način: na prazan želudac pacijent daje krv iz vene, koja se zatim testira različitim metodama:

• PCR u stvarnom vremenu izvodi se na zatvoreni automatizirani način i ima donju granicu za detektiranje RNA virusa, jednaku 15 IU / ml;
• COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU / ml.

Što je viši prag osjetljivosti dijagnostičke tehnike, veće su šanse za pronalaženje najnižih sadržaja virusa u biološkom materijalu koji se istražuje.

Koje vrste analiza se koriste

Analiza koja se uspješno primjenjuje već nekoliko desetljeća naziva se PCR hepatitis, a može se vrlo lako i brzo otkriti. U medicini postoje dvije metode reakcije, koje se temeljno razlikuju jedna od druge:

• kvalitativna metoda otkriva prisutnost genetskog izvora specifičnog virusa u biološkom materijalu;
• kvantitativna analiza mjeri broj genetskih tvari, što omogućuje određivanje stupnja patologije ili procjenu učinkovitosti terapijskog tijeka;
• genotipizacija određuje vrstu virusa prisutnog u tijelu.

Općenito, krvni test pomaže identificirati prirodu viremije i genetski tip patogena. Istraživanje se provodi u pravilu 1 put ovisno o stupnju osjetljivosti dijagnostičkog sustava. Ako je potrebno, ponovno se testiranje provodi pomoću ultrasenzitivnog reagensa.

PCR visoke kvalitete

Što je visokokvalitetna PCR RNA za hepatitis C? Suština reakcije leži u prisutnosti sekvence hepatitis RNA, a reakcija je moguća samo u prisutnosti virusnih proteina slične etimologije u ELISA-i. U procesu uspoređivanja otkriveno je opterećenje i moguće oštećenje područja jetre.

Posebnost ove metode je sposobnost detektiranja čak i prisutnosti odvojenog gena.

Treba primijetiti da nakon primanja rezultata PCR i ELISA testova, pacijentu je potreban odgovarajući tretman, bez obzira na konačni rezultat imunološke analize. Pozitivno ukazuje na infekciju, a PCR negativan pokazuje smanjeni broj virusnih čestica u odnosu na razinu osjetljivosti.

Postoji nekoliko uvjeta koji utječu na proizvodnju negativnog PCR-a i ELISA-e:

• nedostatak odgovarajućih uvjeta prikupljanja materijala;
• dobivena analiza sadrži kontaminaciju;
• u slučaju rane injekcije heparina pacijentu.

Pacijent ne mora slijediti određena pravila za uzorkovanje krvi za PCR analizu, u ovom slučaju kvaliteta ove analize ovisi o liječniku koji provodi postupak. Sposobnost utvrđivanja prisutnosti bolesti (osobito u akutnom obliku) pojavljuje se unutar nekoliko tjedana nakon infekcije.

Kvantitativna analiza

Preporučuje se kvantitativni test za otkrivanje virusnog opterećenja neposredno prije formiranja daljnje terapije i reakcije organizma. Postupak uzimanja uzoraka krvi provodi se na sličan način kao i kod visokokvalitetnog PCR-a i ELISA-e, jedini uvjet je odsustvo mogućnosti pušenja pacijenta prije zahvata.

S obzirom na karakteristike dobivene proučavanjem podataka, povećano opterećenje karakteriziraju pokazatelji od 800000 IU / ml, niski - 400000 IU / ml. Prisutnost virusa u pacijentovom tijelu indicirana je PCR-om za hepatitis nije negativan kvalitativni test.

Ovakva istraživanja omogućuju da se utvrdi koliko je pacijent opasan za ljude oko sebe. Na primjer, utvrđivanje visoke razine ukazuje na povećanu infektivnost pacijenta. Osim toga, rezultati analize pomažu formulirati daljnje najučinkovitije liječenje i određuju koliko se postojeća terapija smatra učinkovitom.

Brza negativna reakcija testova ukazuje na uspjeh odabrane tehnike, a spori ukazuju na potrebu prilagodbe i korištenje višestrukog tretmana.

Proces uzimanja postupka analize ovisi o određenom danu tijeka bolesti. Prvo određivanje provodi se prvog dana nakon prijema bolesnika u bolnicu, a zatim se postupak ponavlja nakon 4, 12 i 24 tjedna nakon uzimanja lijekova.

Prema tome, kvantitativna analiza pokazuje koji je tretman najučinkovitiji, trajanje dostupne terapije i pacijentova opasnost u odnosu na druge ljude.

genotipizacija

U proučavanju analize materijala važno je odrediti točnost genotipa virusa. Trenutno postoji 11 varijanti virusa hepatitisa C, koje zauzvrat uključuju određene podvrste.

Sve ove vrste različito reagiraju na različite tretmane, pri čemu su pojedinačne sorte apsolutno otporne na mnoge lijekove.

Genotip omogućuje određivanje i prikaz stanja jetre. Nije neuobičajeno da se rezultati "ne upisuju" u rezultate, što znači da virus u krvi pacijenta nije otkriven ovim testnim sustavom. To se može otkriti ako se određeni genotip ne podudara s tom zonom. U takvoj situaciji analiza se ponavlja, a za proučavanje materijala koristi se osjetljiviji sustav.

Ultra osjetljiva metoda

Ultrasenzitivna metoda je nužna u određenim slučajevima kada se dijagnoza hepatitisa ne može provesti drugim metodama, a kada uzeti analizu određuje liječnik:

• ako sumnjate na prisutnost virusa hepatitisa C u bolesnika sa skrivenom raznolikošću bolesti;
• prisutnost antitijela protiv virusa hepatitisa C, koja nije potvrđena PCR dijagnostikom;
• kako bi se odredila kvaliteta učinkovitosti odabrane metode liječenja i potvrdila eliminacija bolesti.

Osjetljivost ove metode je mnogo veća od one koja se uobičajeno koristi, međutim, ta metoda ne isključuje dobivanje lažnih rezultata, i pozitivnih i negativnih. U takvoj situaciji važno je kontrolirati kvalitetu postupka i mogućnost kontaminacije samog materijala.

Objašnjenje PCR analize

Dekodiranje analize provodi se na temelju prikazanih materijala, a rezultati laboratorijskih istraživanja uključuju određene podatke koji su gore opisani.

Transkript može uključivati ​​pozitivnu lančanu reakciju PCR polimeraze i negativnu ELISA u testu, što znači da pacijent nema znakova hepatitisa C u krvi, ali u prošlosti je prenio akutni oblik bolesti. U pravilu, kod dijagnosticiranja, stručnjaci pribjegavaju primjeni PCR testnih pokazatelja.

Sumirajući sve navedeno, može se zaključiti da je tijekom analize važno pridržavati se svih pravila i preporuka kako bi dobiveni rezultati bili što točniji, a na temelju dobivenih podataka moguće je odrediti učinkovitost upotrijebljene terapije i daljnju mogućnost potpunog oporavka.

Kvalitativna analiza za hepatitis C

8. ožujka 2017., 12:29 Stručni članci: Nova Vladislavovna Izvčikova 0 10,547

Kvalitativna analiza lančane reakcije polimeraze - PCR za hepatitis C određuje prisutnost ili odsutnost HCV u tijelu. U laboratorijskim uvjetima istražuje se struktura RNA, koja će uključivati ​​virus. U slučaju otkrivanja virusa C potrebno je proći postupak liječenja, jer će zanemareno stanje jetre rezultirati teškim posljedicama. Visokokvalitetni PCR se izvodi nakon oporavka kako bi se potvrdilo odsustvo antitijela. Imenovan i za rutinsku inspekciju. Uz nisku koncentraciju uzročnika u krvi, PCR (kvalitativni) možda neće ništa otkriti, jer dijagnostički sustav ima vlastite pragove osjetljivosti. U početnom stadiju bolesti ili blagom obliku, PCR se izvodi ultradiagnostikom na ultra-osjetljivoj opremi.

Što je RNA virus?

Pojam RNA virusa hepatitisa C (ili RNA virusa hepatitisa C) je sama bolest jetre. Virus C se veže za zdravu stanicu tijela prodirući unutra. Tijekom vremena, proširila se po cijelom tijelu, potrebno je samo ući u krv. Kao posljedica toga, patogen prodire u jetru, spaja se sa svojim stanicama i naporno radi. Jetrene stanice (hepatociti) djeluju pod njezinim utjecajem, prolaze kroz promjene i od toga umiru. Što je duže virus C u jetri, veći je broj stanica koje umiru. S vremenom se razvijaju opasne bolesti koje dovode do maligne degeneracije i smrti.

Infekcija jetre s ovom vrstom virusa ne može se manifestirati izvana. Dugi niz godina ili desetljeća, zaražena se osoba osjeća potpuno zdravom, a samo nasumično ispitivanje najčešće otkriva patologiju. Kada se daruje krv za hepatitis, ispituje se dio lanca RNA (ribonukleinske kiseline) koji je dio ljudskog gena (DNA). Rezultati laboratorijskih ispitivanja ne bi se trebali koristiti za samoliječenje, jer je to samo pokazatelj. Točnu sliku i daljnju dijagnozu bolje određuje liječnik.

Kada se završi: indikacije za istraživanje

U potvrdi HCV-a provedena je PCR analiza (lančana reakcija polimeraze). PCR studije pomažu u pronalaženju uzročnika u RNA strukturi i propisuju učinkovitu terapiju. Imenovan u sljedećim slučajevima:

• otkrivanje znakova upale jetre;
• probirne studije za prevenciju;
• ispitivanje osoba u kontaktu;
• dijagnoza hepatitisa mješovitog podrijetla (određivanje glavnog patogena);
• određivanje stupnja reproduktivne aktivnosti virusa u kroničnom obliku;
• ciroza jetre;
• odrediti učinkovitost propisanog liječenja.

Istraživanje PCR propisuje liječnika da odredi učinkovitost tijeka liječenja hepatitisa.

Postoji kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a. Kvantitativni PCR pokazuje postotak RNA s nosačima virusa u krvi, a kvalitativno ukazuje na prisutnost ili odsutnost virusa. Pozitivan pokazatelj kvalitete (prisutnost hepatitis C RNA) također treba kvantitativno istraživanje. Visoka razina koncentracije uzročnika hepatitisa C povezana je s rizikom prijenosa, odnosno infekcije drugih. Niski brojevi se bolje mogu liječiti. Količina RNA virusa u krvi nije povezana s intenzitetom bolesti. PCR analiza također se provodi u slučaju terapije interferonom kako bi se propisalo trajanje i složenost tijeka liječenja.

Značajke visokokvalitetne PCR analize za hepatitis C

Kvalitativnoj analizi dodijeljen je indikator lančane reakcije polimeraze za sve pacijente koji imaju antitijela na hepatitis C u krvi, a oni koji su bili bolesni i oporavili se moraju ponovno uzeti test. Preporučuje se da se napravi analiza za hepatitis B, zatim, u slučaju pozitivnog zaključka, i za hepatitis D. Također, kvalitativno analiziranu reakciju treba provesti zajedno s drugim testovima krvi. Analize će pokazati potpunu sliku širenja virusa.

Iz rezultata ispitivanja bit će vidljiv ili negativan samo pozitivan test na hepatitis C, odnosno prisutnost ili odsutnost virusa. Ako je izlaz "otkriven", virus je i dalje aktivan. Oznaka "nije otkrivena" označava odsutnost virusa ili njegovu malu količinu. Uz ovaj pokazatelj treba imati na umu da je analitička osjetljivost dijagnostičkih sustava različita i da RNA hepatitis C još uvijek može biti u krvi, ali se ne očituje u analizi.

Posebno osjetljiva PCR metoda otkriva ultra hepatitis C čak iu oskudnim količinama. Upotrijebljena je studija fluorescentne hibridizacije koja je mnogo puta veća od standardnih PCR sustava. Metoda se koristi u nekoliko slučajeva:

• sumnjive skrivene oblike hepatitisa C;
• PCR dijagnostika nije potvrdila patogen, ali postoje antitijela;
• u slučaju oporavka;
• za otkrivanje rane infekcije.

Natrag na sadržaj

Analiza dekodiranja

PCR dekodiranje HCV-a utječe na konačnu odluku kada se postavlja dijagnoza, osobito ultrametod metodom. Glavni nedostatak ove studije je strogo pridržavanje sterilnim uvjetima za uzorak i materijale. Blago odstupanje ponekad pokazuje netočne analitičke zaključke, komplicira dijagnozu i naknadno liječenje. Analiza PCR-a za određivanje hepatitis RNA ne pokazuje uvijek pouzdanu sliku bolesti, ponekad su dopuštene netočnosti iu oba smjera.

Dijagnosticiranje virusa hepatitisa preporuča se za sveobuhvatno ispitivanje.

Norma pokazatelja

Izostanak JgM protutijela na virusni hepatitis C u rezultatima ispitivanja smatra se normom u analizi lančane reakcije polimeraze. Istodobno, rezultati serološke analize ukazuju na prisutnost protutijela na virus C i to je također unutar normalnih granica. Kvalitativna definicija ne pokazuje intenzitet bolesti, on samo otkriva uzročnika hepatitisa C u RNA. Ova se analiza ponavlja nakon tretmana kako bi se potvrdio stvarni oporavak.

odstupanja

Ako su prisutna JgM protutijela na HCV RNA, to ukazuje na razvoj infekcije. Bolest se istovremeno odvija akutno ili kronično, manifestira se u različitim fazama. Ako se zabilježi smanjenje broja antitijela, analiza će pokazati da su rezultati liječenja postignuti tijekom oporavka. U dijagnostici postoje iznimno rijetki slučajevi lažno pozitivnih nalaza. Oni se nalaze u žena tijekom trudnoće i kod osoba s drugim zaraznim bolestima.

Dijagnoza PCR-a za hepatitis C

Ne znaju svi zašto koriste PCR dijagnostičku metodu za hepatitis C. Jedna od najčešćih skupina bolesti su infektivne bolesti probavnog trakta. Najčešće su pogođeni želudac (čirevi), crijeva (kolitis, enteritis) i jetra (hepatitis).

Među svim gore navedenim organima najveće opterećenje je na jetru. U tijelu je uloga jetre izuzetno važna:

1. Gotovo sve metaboličke reakcije odvijaju se u jetri (ovdje se stvaraju sve vrste vitalnih komponenti koje omogućuju tijelu potpuno funkcioniranje).
2. Jetra je glavni organ za detoksikaciju. Uz njegovu pomoć (posebno kroz žuč) uklanjaju se mnogi supstrati koji mogu uzrokovati intoksikaciju i dovesti do ozbiljnih posljedica.

Nažalost, mnogi ljudi ne prate svoje zdravlje, zbog čega jetra počinje patiti. Obično se razvijaju hepatitisi različitih etiologija (virusni, toksični).

Definicija hepatitisa

Virusni hepatitis zauzima važno mjesto među bolestima jetre. Težina tijeka bolesti, složenost liječenja stavljaju ih na prvo mjesto među patologijom druge prirode ovog organa.

Svi su hepatitisi podijeljeni na akutne i kronične. Hepatitis A i B su klasificirani kao akutni, a među kroničnim hepatitisom C je na prvom mjestu.

Ova bolest je uzrokovana virusom hepatitisa C. Karakteristično je da bolest može trajati dugo vremena bez ikakvih kliničkih manifestacija.

Prenosi se uglavnom kroz krv. S protokom krvi, virus ulazi u jetru, gdje počinje razmnožavati svoje stanice. Kao rezultat akumulacije viriona dolazi do uništenja inficiranog hepatocita. Kao odgovor na to, počinju se proizvoditi antitijela, koja počinju napadati ostatke hepatocita. Zbog toga se tijekom vremena razvija bazen protiv jetrenih stanica, što pogoršava tijek bolesti.

S obzirom na to da je bolest blaga asimptomatska ili asimptomatska, a klinički znakovi javljaju se samo kada su stanice značajno pogođene, ova bolest zahtijeva stvaranje dijagnostičkih metoda za otkrivanje njegove prisutnosti i poduzimanje odgovarajućih mjera.

Dijagnoza hepatitisa C: kvalitativne i kvantitativne analize

Trenutno, za dijagnozu hepatitisa C, koriste se metode kao što su biopsija jetre i imunogram.

Oni vam omogućuju da izravno odredite prisutnost inficiranih hepatocita (uzorak biopsije jetre) ili specifična antitijela na zahvaćene stanice (imunogram). Međutim, postoji metoda koja vam omogućuje da pouzdano odredite prisutnost samog virusa. To je lančana reakcija PCR-polimeraze.

Suština ove metode leži u činjenici da se pod određenim uvjetima javlja proizvodnja RNA lanaca. To je zbog činjenice da postoje fragmenti virusne čestice u krvi ili biopsiji o kojoj je riječ. Pri povezivanju s nekim molekulama u mediju dolazi do sinteze lanaca komplementarnih virusnoj RNA. U kasnijoj analizi i usporedbi s poznatom nukleotidnom sekvencom virusa hepatitisa C, moguće je odrediti je li virus prisutan u tijelu i je li oštećenje jetre prisutno.

PCR se provodi nakon detekcije specifičnih antitijela protiv virusa hepatitisa u krvi. Nakon provedenog testa rezultat - "RNA" se otkrije ili ne otkrije. Povremeno može reći "nedovoljno materijala" - u ovom slučaju potrebno je ponovno testiranje hepatitisa C.

Ako je broj virusnih čestica manji od potrebnog minimalnog iznosa, možemo reći da nema hepatitisa, a minimalne količine genetskog materijala mogu biti "zbunjene" zbog mimikrije genetskog materijala ili nekih nukleotidnih sekvenci koje se mogu podudarati s virusom.

1. Kod PCR-a može se primijetiti negativan rezultat kada doista postoje virusne čestice u krvi, ali one su tako male (nedavno je došlo do infekcije ili je analizi prethodila dugotrajna i intenzivna antivirusna terapija) da testni sustav jednostavno nije mogao normalno odrediti njihovu koncentraciju. RNA - "nije otkrivena".
2. Ako PCR ima pozitivan rezultat, tada ima toliko čestica virusa u krvi da njihov broj prelazi donji prag osjetljivosti testnog sustava. U ovom slučaju postoji visok rizik od razvoja infektivnog procesa (ili je već prisutan u prilično uznapredovalom stadiju). Obično je visoka količina virusa već indikacija za liječenje i kasniju transplantaciju jetre.

Ponekad test može postati lažno pozitivan ili lažno negativan.

Lažno negativni PCR rezultat hepatitisa opažen je u slučaju kada su neke komponente prisutne u reakcijskom mediju koje inhibiraju stvaranje kopija virusne čestice. Zbog toga nije moguće dobiti pravu sliku stanja krvi, što pridonosi prolasku virusa i progresiji bolesti. Prisutnost heparina u krvi također može utjecati na reakciju (smanjenjem relativne viskoznosti krvi). Nepravilno tumačenje analize moguće je čak i kada nisu ispunjeni uvjeti prijevoza i skladištenja materijala koji se istražuje.

Lažno pozitivni rezultati, kada se dijagnosticira hepatitis C, PCR se najčešće javlja kada je epruveta ili radna okolina kontaminirana. Osim toga, pozitivni rezultati mogu se promatrati uz prisutnost virusa hepatitisa drugih skupina (zbog unakrsne reakcije).

Kvalitativna analiza PCR-a za otkrivanje hepatitisa C

Prisustvo velikog broja krioglobulina u krvi također izravno utječe na provođenje PCR-a. Zbog toga je nužno odrediti njihovu koncentraciju u krvi prije testiranja na hepatitis C kako bi se unaprijed otkrila distorzija rezultata i spriječila.

Nakon ovih testova postaje jasno jesu li u krvi prisutne virusne čestice. Prilikom određivanja, preporuča se odmah započeti antivirusnu terapiju kako bi se usporilo napredovanje procesa. Za razliku od hepatitisa B, nema potpunog lijeka za hepatitis C; bolest prelazi u latentnu fazu i počinje sporije. Oštećenje jetre je neizbježno. U posljednjoj fazi procesa, kada se jetra više ne može nositi sa svojom funkcijom, može zahtijevati njezinu transplantaciju.

Liječenje se provodi uglavnom s dva lijeka - interferonom i ribavirinom.

Dokazana je njihova učinkovitost u usporavanju procesa poraza hepatocita. Na putu, infuzijska terapija je nužno propisana kako bi se olakšalo rad jetre.

Svi pacijenti koji su vidjeli povećanje broja virusnih čestica u krvi nužno su registrirani kod hepatologa. Nekoliko puta godišnje preporuča se preventivni pregled kako bi se odredilo napredovanje procesa i pravodobno otkrivanje indikacija za transplantaciju. Osim toga, moguće je koristiti hepatoprotektore, iako se mišljenja liječnika donekle razlikuju. Neki vjeruju da ti lijekovi omogućuju da prekinete proces i zaštitite još nepromijenjene hepatocite; drugi su uvjereni da ih nema smisla, te da se provodi intenzivna antivirusna terapija.

Dakle, hepatitis C spada u kategoriju bolesti, čija identifikacija predstavlja neke poteškoće. Poboljšanje dijagnostičkih metoda, kao i pravovremene preventivne pretrage smanjit će učestalost ove bolesti. Također je važno spriječiti ovu bolest. Trebalo bi oprezno izbjegavati kontakt s krvlju, odbijati uzimati lijekove, tek tada će se ta bolest iskorijeniti. Glavna stvar u prevenciji i liječenju je svijest pacijenta o svom zdravlju.

Provođenje PCR analize za hepatitis C i dekodiranje rezultata

PCR analiza hepatitisa C je studija čija je glavna svrha identificirati genetski materijal uzročnika. Analiza otkriva uzročnika bolesti primjenom lančane reakcije polimeraze. Ova dijagnoza ima visok stupanj točnosti, specifičnosti za otkrivanje odsutnosti ili prisutnosti virusne infekcije.

Suština dijagnoze

Da bi se provela PCR analiza za određivanje virusa hepatitisa C od pacijenta, uzeta je venska krv koja potencijalno sadrži RNA (ribonukleinsku kiselinu) HCV željenog virusa.

PCR test za hepatitis C podrazumijeva postupak dodavanja čestica krvi pacijentu:

• početnice (kratke umjetno sintetizirane regije potrebnog gena);
• poseban enzim (RNA polimeraza).

Nakon uzorkovanja, biološki materijal se šalje na istraživanje u laboratorij. Jedan dio krvi je potreban za izravnu PCR analizu, druga je poslana na ispitivanje pomoću ELISA. Enzim u kratkom vremenu može povećati broj genetskog materijala virusa patogena. U posebnom uređaju provodi se nekoliko ciklusa procesa topline i hlađenja. U završnoj fazi, dobiveni materijal se uspoređuje s genima virusa i zaključuje se o prisutnosti ili odsutnosti patologije u tijelu pacijenta.

Suština i provedba PCR analize u laboratoriju. Snimio je Sibirski medicinski laboratorij.

Vrste istraživanja

Postoje 3 vrste dijagnostike koje omogućuju utvrđivanje prisutnosti virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu:

• genotipizacija;
• kvaliteta;
• kvantitativna.

Kvalitativna metoda

Dijagnoza hepatitisa C kvalitativnom metodom primjenjiva je za bolesnike kod kojih su u krvi utvrđena protutijela na virus. U slučaju prisutnosti akutne faze HCV RNA, takve dijagnostičke mjere mogu odrediti prisutnost bolesti unutar 1-2 tjedna nakon infekcije. Tijekom tog razdoblja, protutijela za hepatitis C još nisu razvijena.

Kvantitativna metoda

Kvantitativna dijagnostička metoda koristi se za određivanje koncentracije virusa u uzorcima krvi. Takav test za viremiju (stupanj koncentracije) omogućuje točno određivanje broja jedinica virusne RNA. Krajnji rezultat je izražen u odgovarajućem volumenu. Ako govorimo o kvantitativnoj analizi, onda se pokazatelji mjere u 1 ml (1 kub. Cm).

Parametar virusnog opterećenja označava razinu infektivnosti bolesti, odnosno odražava stupanj "infektivnosti" pacijenta. U praksi, to znači da što je veća koncentracija virusa u krvi, to su veće šanse da pacijent zarazi druge hepatitisom C. Kvantitativna metoda istraživanja također vam omogućuje da utvrdite kvalitetu i učinkovitost liječenja.

genotipizacija

Genotipizacija otkriva mutacije uzročnika bolesti. Prije propisivanja plana liječenja utvrđuje se genotip virusa: o tome ovisi kvaliteta i trajanje terapije. Na primjer, u liječenju I-tipa bolesti, učinkovitost je 60%, u slučaju II, III-tipa - oko 80%.

Prednosti PCR analize hepatitisa

Među glavnim prednostima postupka su:

1. Mogućnost rane dijagnoze. PCR analiza može detektirati prisutnost virusa u ranim stadijima infekcije.
2. Rezultati niske pogreške. Istraživani biološki resurs omogućuje dijagnosticiranje dijela genetskog materijala koji je karakterističan samo za jednu vrstu virusne infekcije. Ova okolnost omogućuje sprečavanje pogrešnih dijagnostičkih rezultata.
3. Visok stupanj osjetljivosti. PCR analiza je u stanju detektirati RNA virusa u malim količinama, što također omogućuje pravovremeno praćenje latentnih infekcija.

Indikacije za

Testiranje na PCR za hepatitis C je potrebno, ako je dostupno:

• kontakt s bolesnim ljudima, što može dovesti do infekcije;
• simptomi ciroze jetre (povećanje slezene, neuobičajene promjene u veličini jetre, otkrivanje venskog pleksusa na trbuhu ispod kože);
• pozitivni rezultati ELISA;
• povećana aktivnost AST i ALT (manifestirana u biokemijskoj analizi krvi);
• potrebu za kontrolom provođenja antivirusne terapije;
• početni stadij liječenja za potrebu uspostavljanja virusnog opterećenja;
• provođenje završne faze terapije kako bi se isključili mogući recidivi;
• pacijent ima hepatitis B kako bi isključio razvoj mješovitog oštećenja jetre.

Kako se pripremiti za davanje krvi za PCR istraživanje

Priprema za PCR analizu uključuje sljedeće preporuke:

• ujutro se uzima krv;
• analiza se provodi na prazan želudac, pa je preporučljivo uzeti pauzu između posljednjeg unosa hrane od 8-10 sati;
• nekoliko dana prije dijagnoze treba isključiti masnu, začinjenu i prženu hranu, alkoholna pića i pušenje;
• dan prije analize treba se suzdržati od teških fizičkih napora, isključiti nastavu u teretani ili bazenu.

Rezultati analize: norme i odstupanja

Sama analiza nije dugoročna, a visokokvalificirani specijalist hepatolog ili infektivni specijalist dešifrira rezultate PCR-a za hepatitis C. Na temelju rezultata analize bolesnik je dijagnosticiran.

Da bi se rezultati ankete ispravno dešifrirali, uzimaju se u obzir sljedeći pokazatelji:

• biokemijska analiza krvi;
• podaci o ultrazvuku;
• rezultati biopsije.

Tumačenje kvantitativne analize

Pri dobivanju rezultata PCR kvantitativne analize uzimaju se u obzir sljedeći pokazatelji:

PCR metoda za otkrivanje hepatitisa C

PCR je lančana reakcija polimeraze koja se koristi za određivanje prisutnosti hepatitisa C u serumu, a rezultat može biti pozitivan i negativan.

Prednosti PCR metode

Ova dijagnostička metoda ima sljedeće prednosti:

1. PCR metoda omogućuje određivanje sljedećih rezultata:
   • prisutnost RNA virusa;
   • stupanj zračenja;
   • izvorna genetska informacija;
   • jedinstvenost i jedinstvenost genetskih podataka.
2. Možete koristiti bilo koji klinički materijal:
   • krv
   • plazma;
   • urina;
   • tjelesne tekućine i izlučevine;
   • sputum i drugi.
3. Omogućuje vam da u krvi odredite više od jednog mikroorganizma odjednom, za razliku od drugih uzoraka.
4. Dobivanje rezultata u roku od 24 sata.
5. Pojednostavljene metode za skladištenje i transportnu analizu, patogeni se određuju čak iu mrtvoj sredini.
6. Jedinstvenost PCR-a omogućuje vam da identificirate određene mikroorganizme koji nisu podložni bilo kojem drugom uzorku.
7. Visok stupanj osjetljivosti reagensa, test je najtočniji u svojoj vrsti.

Značajke kvalitativne analize PCR-a

Proveden je kvalitativni test kako bi se utvrdila prisutnost virusa u krvi i dobio negativan ili pozitivan rezultat.

Pokazatelj za ovu vrstu dijagnoze je otkrivanje antitijela na hepatitis C u tijelu pacijenta.

Mogući ishodi:

• otkriveno (pozitivno);
• nije otkriveno (negativno).

Test kvalitete nije prikladan za pacijente s vrlo niskim sadržajem virusa u krvi, tako da ima određenu osjetljivost.

Rezultat "otkriven"

Otkrivanje virusa hepatitisa C može biti nekoliko tjedana nakon infekcije tijela, čak iu odsutnosti antitijela na ovaj patogen. Ovaj rezultat ukazuje na prisutnost u tijelu i krvnoj grupi fragmenta RNA karakterističnog za hepatitis C.

Pacijent se smatra zaraženim ovim virusom i dalje se širi patogene stanice u tijelu.

Rezultat "nije otkriven"

Ova opcija sugerira da u uzorku biološkog materijala koji se istražuje nema fragmenata RNA specifičnih za hepatitis C. To je negativan rezultat.

Osjetljivost testa ne otkriva nizak sadržaj RNA fragmenata, tako da rezultat "nije detektiran" nije uvijek vjerojatan.

Značajke interpretacije rezultata

Glavna značajka interpretacije rezultata je prag osjetljivosti PCR metode.

To ovisi o sljedećim pokazateljima:

• točnost istraživanja;
• vrstu i kvalitetu korištene opreme.

Primijećeno je da osjetljivost može varirati između 10-500 IU / ml. Iz toga slijedi da ako je virus prisutan u tijelu ispitivanog pacijenta u koncentraciji manjoj od 10 IU / ml, test će pokazati rezultat "nije detektiran". Ali to ne znači da je patogen potpuno odsutan.

Varijante dijagnostičkih sustava

Trenutno postoje sljedeće opcije za dijagnostičke sustave:

1. Ako se uzme krv od pacijenta na antivirusnom liječenju, potrebno je upotrijebiti dijagnostičke sustave s osjetljivošću od najmanje 50 IU / ml. U tu svrhu koriste se sljedeći analizatori:
   • Cobas Ampicolor HCV test;
   • RealBest HCV RNA.
2. Za definitivnu dijagnozu "hepatitisa C" potrebno je otkriti RNA virus u tri različita uzorka biološkog materijala. Ove preporuke je razvila Svjetska zdravstvena organizacija. Ako je rezultat tri puta negativan, dijagnoza nije potvrđena.
3. Trenutno, uz PCR metodu, postoji i točniji test, nazvan TMA (metoda transkripcijske amplifikacije). Njegov prag osjetljivosti mnogo je veći nego u drugim metodama dijagnoze.

Raspon otkrivenih modifikacija virusa

U ovoj fazi razvoja genetike poznato je nekoliko tipova i varijanti modifikacije virusa.

Laboratorijska dijagnostika u našoj zemlji s apsolutnom preciznošću može odrediti sljedeće genotipove:

Značajke PCR kvantitativne analize

Kvantitativna analiza je definicija virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu. Tijekom ispitivanja, RNA i virusno opterećenje u polaznom materijalu određuje se PCR-om. Inače, možemo reći da vam test omogućuje da odredite koliko se virusnih stanica nalazi u biološkoj tekućini. Za ovu vrstu istraživanja koristi se samo venska krv. Nema posebne pripreme testa.

Kvantitativna analiza omogućuje praćenje u već započetoj fazi liječenja i procjenu njegove učinkovitosti. Za procjenu, podaci o testu se uzimaju prije i tijekom terapijskih intervencija. Uz pomoć dobivenih rezultata moguće je predvidjeti tijek bolesti.

S uspjehom odabrane metode liječenja nakon 3 mjeseca, količina RNA trebala bi se smanjiti nekoliko puta. Prema preporukama, kvantitativna analiza se provodi nakon jednog, zatim nakon tri i šest mjeseci. Posljednji rezultat s uspjehom liječenja trebao bi biti negativan.

Evaluacija rezultata kvantitativnog PCR testa

U našoj zemlji postoje dvije mogućnosti za procjenu rezultata kvantitativnog PCR testa:

• broj kopija po mililitru biološke tekućine;
• broj međunarodnih jedinica po mililitru.

Za dobivanje međunarodnih jedinica broj primjeraka podijeljen je s 4.

• visoko s PCR iznad 800,000 IU / ml;
• niska s PCR ispod 400,000 IU / ml.

Rezultat kvantitativnog testa pruža 2 opcije:

• "Ispod mjernog raspona";
• "Nije otkriveno" (negativno).

Ocjena: "ispod mjernog područja"

Takav zaključak je napravljen kada kvantitativni RNA test nije otkrio uzročnika hepatitisa C u staničnom izvornom materijalu, ali je virus još uvijek prisutan u krvi. Pouzdanost analize potvrđena je kvalitativnom metodom, budući da prag osjetljivosti kvantitativnog testa ne može otkriti male vrijednosti i koncentracije patogena.

Ocjena: "nije otkriveno"

Takav zaključak je napravljen kada RNA virusi hepatitisa C nisu bili otkriveni u izvornom materijalu tijekom dijagnoze, što je negativan rezultat.

Tumačenje rezultata analize kvantitativnog PCR testa

Koristeći indikator virusnog opterećenja odredite:

• stupanj zanemarivanja bolesti;
• koliko je pacijent zarazan;
• učinkovitosti antivirusne terapije.

Što je viša stopa virusa hepatitisa C u tijelu, to je pacijent opasniji za druge ljude i što je progresivnija njegova bolest.

Hepatitis C PCR je važna dijagnostička metoda, osobito tijekom terapijskih intervencija. Zahvaljujući dobivenim negativnim ili pozitivnim rezultatima moguće je procijeniti njihovu učinkovitost, potpuno izliječiti pacijenta ili skratiti vrijeme liječenja.

PCR analiza za hepatitis C

Za dijagnozu "kroničnog virusnog hepatitisa C (CVHS)" potrebno je sveobuhvatno ispitivanje osobe, što uključuje kliničke, laboratorijske i instrumentalne studije. S točke gledišta dijagnoze za ispravnu dijagnozu važno je PCR metoda - lančana reakcija polimeraze.

Što ova analiza pokazuje i zašto je potrebna?

Ova laboratorijska metoda otkriva RNA virusa hepatitisa C u ljudskoj krvi. Zajedno s enzimski imunosorbentnim testom (ELISA) za antitijela na virus, PCR se koristi za postavljanje dijagnoze CVHC i njenog patogenog genotipa. Ovo je jedno od najnovijih metoda laboratorijske dijagnostike. Njegova pouzdanost u CVHS-u prelazi 97%, što se smatra vrlo dobrim pokazateljem za istraživanje.

Postoje tri PCR testa krvi za CVHS: kvalitativna, kvantitativna i genotipizacija virusa. Prva studija (kvalitativna analiza) virusa otkriva je u krvi i stoga se koristi samo za dijagnozu.

Druga (kvantitativna) studija određuje stupanj virusnog opterećenja na tijelu, stoga se koristi za praćenje učinkovitosti terapije.

Treći PCR (genotipizacija) pojašnjava dijagnozu, utvrđuje genotip virusa, što je vrlo važno za postavljanje ispravnog antivirusnog liječenja.

Suština tehnike lančane reakcije polimeraze je uporaba enzima koji umnožavaju genetski materijal patogena u biomaterijal. U procesu takve replikacije, epruveta s krvi se zagrijava nekoliko puta i ohladi na temperaturu potrebnu za ubrzavanje enzimske reakcije. Kao rezultat ovih manipulacija, količina virusnog genoma povećava se mnogo puta, dopuštajući da se otkrije čak i uz minimalnu količinu.

PCR dijagnostika ima mnoge prednosti u odnosu na druge laboratorijske testove:

• visoka osjetljivost - 97-98%;
• zajamčena analitička specifičnost (otkriva točno onaj patogen koji želite pronaći, a ne njegov srodni soj);
• brzina provođenja (potrebno je više od 2 dana za dobivanje zaključka).

Tri tipa PCR testova

Visokokvalitetna PCR analiza dodijeljena je svim pacijentima kod kojih je ELISA analiza otkrila protutijela na HVGS virus. Nakon provedbe PCR-a visoke kvalitete, mogu se dobiti dvije opcije odgovora: "RNA je detektirana" ili "RNA nije detektirana". Da bi se otkrila minimalna količina virusa u krvi, potrebni su testni sustavi s osjetljivošću od najmanje 50 IU / ml. Ako je koncentracija virusa u krvi pacijenta manja nego što dijagnostika može odrediti, rezultat studije može biti lažno negativan. Kako bi se izbjegla takva dijagnostička pogreška, laboratoriji koji izvode PCR dijagnostiku trebaju imati visoko osjetljive testne sustave. U laboratoriju "Invitro", na primjer, koriste se testovi osjetljivosti od 15 IU / ml. Laboratorijski radnici su dužni pružiti informacije o osjetljivosti testova na pacijente i liječnike na njihov prvi zahtjev.

Kvantitativna analiza PCR-a određuje stupanj viremije, odnosno koncentraciju patogena u krvi, virusno opterećenje. Rezultat ove studije, za razliku od visokokvalitetnog PCR-a, izražen je brojevima, na primjer 2 × 10 x 6 IU / ml, što znači 2 milijuna međunarodnih jedinica u 1 ml krvi. Neki laboratoriji koriste drugi pokazatelj - broj kopija / ml. Ova dva pokazatelja se lako pretvaraju: 1 međunarodna jedinica jednaka je 4 kopije RNA. Dakle, 2 x 10 x 6 IU / ml će značiti da 8 x 10 x 6 kopija virusne RNA u 1 ml, tj. 8 milijuna kopija u 1 ml krvi.

Genotipizacija je definicija jednog od šest genotipova virusa. Klinička slika, brzina razvoja komplikacija jetre i prognoza za budući život pacijenta ovise o genotipu uzročnika. Genotip virusa je vrlo važan već u fazi dijagnoze, budući da kombinacija lijekova i trajanje terapijskog tijeka koji se dodjeljuje pacijentu ovisi o njegovoj točnoj određenosti.

Međutim, čak i ovo naizgled "savršeno" laboratorijsko istraživanje ima svoje nedostatke:

• studija replicira genetski materijal svih patogena, čak i neživih, koji mogu iskriviti rezultat. Stoga, kako bi se pratila učinkovitost uz pomoć PCR-a, re-analiza se provodi najranije 2 mjeseca nakon prethodnog, tako da mrtvi virusi mogu „napustiti“ organizam pacijenta;
• dio virusnog genoma, koji se određuje pomoću testnih sustava, teoretski može biti prisutan u drugim virusima ili mikroorganizmima, tako da postoji mogućnost lažno pozitivnog odgovora;
• virusi brzo mutiraju. Ponekad je brzina i opseg mutacije virusa toliko visok da testni sustav prestane hvatati njihov genom. Kao rezultat, moguć je lažno negativan rezultat.

Da bi se razriješili ovi nedostaci, proizvođači laboratorijskih testnih sustava za PCR dijagnostiku stalno provode svoje testove, uključujući unakrsne reakcije i osjetljivost na određeni genotip virusa.

Kako uzeti PCR test za hepatitis C?

Da bi zaključak PCR ispitivanja bio pouzdan, potrebno je strogo slijediti pravila za pripremu:

• studija se provodi na prazan želudac (glukoza, masti, minerali koji ulaze u krv iz hrane, mogu utjecati na brzinu i kvalitetu enzimske reakcije);
• jaz između posljednjeg obroka i uzorkovanja krvi za analizu trebao bi biti najmanje 8 sati;
• uoči istraživanja zabranjeno je uzimati alkohol i konzumirati masnu hranu, čije je razdoblje uklanjanja dugotrajno;
• dan prije odlaska u laboratorij treba izbjegavati jak fizički i emocionalni stres;
• do trenutka uzimanja uzorka krvi nije preporučljivo pušiti.

Kako bi se izbjeglo pojavljivanje lažnih zaključaka, navodni pacijent mora doći u laboratorij nešto ranije od uzimanja krvi. Potrebno je 15-20 minuta da osoba uhvati dah, smiri se. Adrenalin, koji je prisutan u krvi nakon kratke šetnje, može utjecati na rezultat pregleda.

Ako pacijent koji je upućen na analizu uzima lijekove, trebao bi o tome obavijestiti liječnika. Moguće je da će neke od njih morati neko vrijeme biti odbijene (ako je moguće).

Rezultat analize PCR-a za hepatitis C

Dekodiranje rezultata uključeno je u laboratorijskog liječnika laboratorija koji je proveo analizu. Dekodiranje je određivanje odstupanja rezultata dobivenog iz norme. Stopu pokazatelja uspostavlja izravno proizvođač testnog sustava, koji koristi laboratorij za dijagnostiku. Stoga ne iznenađuje da je u nekim laboratorijima virusno opterećenje određeno u IU / ml, au drugima u kopijama / ml.

Nakon što je dobio zaključak, potrebno ga je moći ispravno protumačiti. Liječenje rezultata istraživanja treba provoditi liječnik pacijenta s hepatitisom C. Samo nakon objektivnog, instrumentalnog i laboratorijskog pregleda pacijenta, liječnik može dobiti dovoljnu količinu podataka za ispravnu interpretaciju dobivenih rezultata PCR-a.

Evaluacija kvalitativne analize, u pravilu, ne uzrokuje poteškoće, čak ni u bolesnika. Rezultat može biti samo jedan: "otkriven" ili "nije otkriven". U ovom slučaju, druga je norma.

Pokazatelji kvantitativne analize je teže interpretirati. Prikazuje stupanj virusnog opterećenja pacijenta. Čak i među hepatolozima nema konsenzusa o tome kako liječiti otkrivenu viremiju. Većina liječnika je sklona vjerovati da bi trebalo razmotriti veliko opterećenje veće od 8 × 10 x 5 IU / ml. Opterećenje veće od 1 x 10 x 7 IU / ml smatra se vrlo visokim, dok je nisko opterećenje manje od 4 × 10 x 5 IU / ml.

Stupanj virusnog opterećenja ukazuje na virulenciju (agresivnost) virusa: što je veća količina u krvi, to se brže mogu razviti komplikacije jetre. Visoka koncentracija virusa u krvi trudnice povećava vjerojatnost njegovog prodiranja kroz hemato-posteljnu barijeru do fetusa. Viremija također utječe na učinkovitost liječenja: s malim brojem, učinkovitost terapije je veća nego kod visokih.

Da bi bili sigurni u točnost analize PCR-a za hepatitis C, potrebno je dati prednost samo onim laboratorijima koji su dobro dokazani. Politika određivanja cijena u ovom slučaju ne bi trebala imati primarnu ulogu.

PCR ispitivanje hepatitisa C: vrste, indikacije, transkript

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja se javlja kod oštećenja jetre. U osamdeset posto bolesnika postaje kronično. Virus se multiplicira u stanicama jetre - hepatocitima - i uzrokuje njihovu smrt. Mrtvo tkivo zamjenjuje žarišta vezivnog tkiva, razvija se fibroza.

Budući da se fibroza razvija, jetra ne može obavljati svoje funkcije, počinje ciroza jetre, što je opasno za komplikacije: povišeni tlak u sustavu portalne vene, gastrointestinalno krvarenje, poremećaj zgrušavanja krvi, mentalne promjene zbog oštećenja jezgre mozga otrovnim proizvodima.

Uzrok bolesti je infekcija virusom iz obitelji Flaviviridae, koja pripada tipu RNA virusa. To znači da je genetski materijal kojim se proteini sintetiziraju, kodiran u molekuli ribonukleinske kiseline. Infekcija se odvija kroz krv, seksualno i od trudnice do fetusa. Nažalost, dovoljna količina vremena može proći između infekcije i početka proizvodnje antitijela - od dva tjedna do šest mjeseci. To ne dopušta utvrđivanje infekcije ELISA-om i početak liječenja u ranoj fazi.

Što je PCR analiza?

PCR je metoda molekularne analize koja omogućuje detekciju genetskog materijala patogena već u prvom tjednu nakon infekcije uz pomoć lančane reakcije polimeraze. Studija ima visoku specifičnost, točnost i omogućuje ne samo utvrđivanje prisutnosti ili odsutnosti virusa, nego i njegovu koncentraciju i genotip.

Za studiju se uzima pacijentova krv u kojoj se potencijalno može locirati virusna RNA. Prajmeri se dodaju u umjetno sintetizirane regije krvi željenog gena male duljine, a RNA polimeraza je poseban enzim koji u više navrata povećava količinu genetskog materijala patogena. Pomoću posebnog uređaja izvodi se nekoliko ciklusa grijanja i hlađenja. Zatim se materijal analizira i uspoređuje s poznatim genima virusa, na temelju čega se donosi zaključak o prisutnosti ili odsutnosti infekcije.

Vrste PCR analize za hepatitis C

Postoje tri vrste PCR analize:

Kvalitativna analiza PCR-a. Prva faza studije. To vam omogućuje da identificirate genetski materijal virusa u krvi.

Kvantitativna analiza PCR. Omogućuje vam da odredite količinu virusa - koncentraciju genetskog materijala patogena u jednom mililitru krvi. Ova studija se provodi prije početka terapije, a zatim u prvom, četvrtom, dvanaestom i (ako je tečaj dugačak) dvadesetčetvrtog tjedna liječenja kako bi se ocijenila njegova učinkovitost.

Genotipizacija. Uzročnik hepatitisa C često i brzo mutira. Bilo je sedam varijanti ovog genotipa virusa na planetu. U Rusiji su prvi, drugi i treći tip uobičajeni. Svaki od genotipova ima različitu otpornost na terapiju, na primjer, učinkovitost liječenja prvog tipa je šezdeset posto, a za drugu i treću ta brojka dostiže osamdeset pet. Stoga, kako bi se odabrali prikladni lijekovi i propisao tijek terapije dovoljnog trajanja, potrebno je točno odrediti koji je tip virusa inficiran.

Indikacije za PCR analizu za hepatitis C

PCR ispitivanje propisano je u sljedećim slučajevima:

• kontakt s bolesnom osobom na kojoj se može pojaviti infekcija;
• imunološki test pozitivnog enzima;
• znakovi ciroze jetre: promjena veličine jetre, uvećana slezena, pojava potkožnog venskog pleksusa na trbuhu;
• pojava simptoma oštećenja jetre: bol u desnom abdomenu, žutilo kože;
• povećana aktivnost ALT i AST u biokemijskoj analizi krvi;
• prije početka tretmana za određivanje virusnog opterećenja;
• pratiti učinkovitost antivirusne terapije;
• nakon liječenja kontrolirati relaps;
• u prisutnosti dijagnosticiranog hepatitisa B, kako bi se isključilo miješano oštećenje jetre.

Objašnjenje PCR studija o hepatitisu C

Dekodiranje PCR analize i enzimskog imunološkog testa za hepatitis C treba obaviti hepatolog ili specijalista za infektivne bolesti. Analiza rezultata PCR-a nužna je u kombinaciji s podacima biokemijske analize krvi, biopsije i ultrazvuka. Samo kvalificirani liječnik moći će analizirati rezultate istraživanja i na temelju njih propisati ispravno liječenje.

Dekodiranje kvalitativne analize.

U analiziranom biološkom materijalu pronađen je genetski materijal patogena. Potvrđena infekcija.

Infekcija je odsutna ili je količina RNA patogena ispod granice osjetljivosti.

Dekodiranje kvantitativne analize.

Normalna stopa za zdrave osobe. To znači da ispitni materijal ne sadrži hepatitis C RNA, ili je njegova koncentracija ispod praga osjetljivosti studije.

Koncentracija RNA je ispod kvantitativnog raspona. Ovi rezultati se vrlo pažljivo tumače, povezuju ih s podacima iz drugih studija, često se ponovno proučavaju.

Razina virusnog opterećenja u danoj koncentraciji smatra se niskom. Obično, smanjenje količine virusa znači da je terapija uspješna.

Više od 8 x 10 ^ 5 IU / ml

Razina virusnog opterećenja u danoj koncentraciji smatra se visokom.

Više od 2,4 x 10 7 IU / ml

Količina RNA je iznad gornje granice kvantifikacijskog raspona. Nemoguće je izvući zaključke o stupnju virusnog opterećenja s ovim rezultatom. Obično se u takvim slučajevima test ponavlja s razrjeđivanjem uzorka krvi.

Dekodiranje genotipizacije.

RNK određenog genotipa

Virus hepatitisa C određenog genotipa i podtipa detektiran je u biomaterijalu. Rezultat je kodiran rimskim brojevima i latiničnim slovima, na primjer - 1a, 2b. Ukupno ima sedam genotipova i šezdeset sedam podtipova, ali u Rusiji postoje samo tri prve vrste.

Otkrivena RNA virusa hepatitisa C

RNA je pronađena u krvi rijetkog genotipa za Rusiju, koji se ne može pripisati prvom, drugom ili trećem tipu. Potrebna su dodatna istraživanja.

Ovaj rezultat ukazuje da je pacijent zdrav, ili da je količina RNA patogena premala.

Moguće je da je PCR analiza za hepatitis C negativna, a enzimski imunosorbentni test prepoznaje antitijela protiv virusa. To znači da je pacijent imao akutni hepatitis C i oporavio se sam. Oko dvadeset slučajeva infekcije rezultira spontanim oporavkom ako tijelo pacijenta ima dovoljnu otpornost na infekciju.

Iako je PCR vrlo precizan, njegovi rezultati mogu biti iskrivljeni u sljedećim situacijama:

• krv je prevezena u laboratorij u neodgovarajućim uvjetima, povrijeđena je temperatura;
• biomaterijalni uzorak je bio kontaminiran;
• bili su zaostali tragovi heparina i drugih antikoagulansa u krvi;
• Istražitelji su pronađeni kao inhibitori - tvari koje usporavaju ili zaustavljaju lančanu reakciju polimeraze.

Prednosti PCR-a u odnosu na druge metode

Dijagnoza u ranim fazama. PCR detektira genetski materijal uzročnika. Pomoću imunofluorescentne analize mogu se identificirati samo imunoglobulini - tvari koje tijelo proizvodi kao odgovor na infekciju. U slučaju infekcije hepatitisom C, jaz između infekcije i početka imunološkog odgovora može biti nekoliko tjedana i mjeseci, u ovom trenutku ELISA će biti nedjelotvorna. PCR će dati odgovor u prvom tjednu nakon infekcije.

Mala vjerojatnost pogreške. U istraživanom materijalu određuje se područje genetskog materijala, koje je karakteristično samo za jednu vrstu patogena. To eliminira lažne rezultate. Kada su moguće ELISA pogreške, budući da se isti tip antitijela može osloboditi protiv različitih virusa - takva se antitijela nazivaju križna antitijela.

Visoka osjetljivost. PCR omogućuje detektiranje uzročnika RNA čak iu minimalnim količinama. To omogućuje identificiranje skrivenih infekcija.

Kako se pripremiti za davanje krvi za PCR istraživanje

Za PCR analizu hepatitisa C sakupljena je venska krv. Obično se iz pacijentove vene uzimaju dva dijela krvi: prvi se šalje na PCR, a drugi na ELISA. To je učinjeno kako bi se točnije procijenilo koliko je pacijent zaražen virusom i kako se protiv njega bori imunitet.

Obično je potrebno da se pacijent pridržava sljedećih pravila:

• krvni test se uzima ujutro;
• Razmak između zadnjeg obroka i darivanja krvi trebao bi biti osam do deset sati;
• dva ili tri dana prije analize potrebno je napustiti prženu i masnu hranu i alkohol;
• dvadeset i četiri sata prije analize, bolesnik treba izbjegavati tjelesne napore: nemoj nositi utege, ne idi u teretanu ili bazen.