Dostupnost suvremenih lijekova protiv hepatitisa B (HBV) s jasnim indikacijama za njihovu primjenu zahtijeva točnu i brzu provjeru dijagnoze. Međutim, zbog oskudnih kliničkih podataka u prvim tjednima bolesti i ograničenih imunoloških metoda analize, stopa dijagnoze se smanjuje.
Prisutnost biljega anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe omogućuje potvrdu HBV-a ili utvrđivanje činjenice prethodne bolesti. No, moguće je odrediti prisutnost aktivnih virusnih čestica u krvi i brojati ih u vrijeme ispitivanja pomoću PCR-a - kvantitativni test u stvarnom vremenu za otkrivanje hepatitisa B. Metoda, u usporedbi s dijagnostičkim metodama ELISA, rješava dijagnostičke probleme i omogućuje predviđanje tijeka bolesti tijekom primanja. antivirusni lijekovi.
Osnove dijagnoze bolesti
Dijagnoza hepatitisa B temelji se na procjeni kliničkih manifestacija, enzimskih imunotestova i instrumentalnih metoda istraživanja. Bolest se nastavlja u akutnoj fazi nakon perioda inkubacije i, ovisno o dozi infekcije i djelotvornosti liječenja, ulazi u kroničnu fazu. Glavni cilj liječenja je spriječiti kroničenje, odnosno eliminaciju svih virusnih čestica iz krvi. Klinički tijek bolesti je lijek bez naknadne viremije.
Činjenicu eliminacije infekcije treba dokazati kvantitativnom metodom istraživanja.
Budući da bilo koji kvalitativni enzimski imunotest omogućuje indirektno dijagnosticiranje HBV-a, tj. Ne pokazuje prisutnost patogena u unutarnjem okruženju tijela, karakterizira imunološki odgovor na infekciju, praćenje učinkovitosti terapije i činjenica da je liječenje teško dokazati. Dakle, bolesnik s hepatitisom B ili uz prisutnost dijagnostičkih kriterija u svoju korist treba provesti lančanu reakciju polimeraze kako bi se kvantificirao broj virusnih čestica u krvi. Dijagnostička brzina je nedostatak kopija DNA infekcije.
Opis dijagnostičke metode
Vrlo osjetljiva metoda PCR dijagnoze hepatitisa B spada u kategoriju genetski modificiranih molekularno-bioloških studija. Kroz njega se određuje količina virusne DNA u biološkom materijalu pacijenta i dopuštena brzina. Prema dobivenim rezultatima utvrđuje se broj virusnih čestica po jedinici volumena. Materijal za dijagnostički test je venska krv pacijenta. Unos je poželjan na prazan želudac zbog mogućeg učinka chyle seruma na rezultat istraživanja.
Dobiveni rezultati moraju se dati liječniku za tumačenje i određivanje daljnje taktike. Nezavisno dekodiranje ne predstavlja dijagnostičku vrijednost.
Značaj rezultata broja čestica virusa dobivenih PCR metodom premašuje vrijednost imunotestova enzima. Budući da analiza u načinu rada u stvarnom vremenu pokazuje prisutnost uzročnika bolesti u krvi, njegov je sadržaj informacija viši od drugih. Ako ELISA ukazuje samo na prisutnost antitijela, koja se promatra od 4 tjedna inkubacije i traje više od 8 tjedana nakon eliminacije virusa iz krvi, onda lančana reakcija polimeraze jasno potvrđuje aktivni tijek bolesti ili njezino izlječenje, karakterizira dinamiku propisane terapije.
Lančana reakcija polimeraze s kvantitativnim određivanjem čestica patogena rješava dijagnostička pitanja u korist zaustavljanja liječenja zbog oporavka ili kontinuirane terapije zbog nedostatka učinkovitosti. Metoda je što je moguće specifičnija za HBV virus i odlikuje se prihvatljivom pogreškom.
Indikacije i ciljevi izvedbe
Kvantitativna analiza hepatitisa B je najpouzdanija i omogućuje potvrdu podataka dobivenih ELISA metodama. Imenovan je kada:
- dobivanje pozitivnog dijagnostičkog rezultata ELISA;
- liječenje pacijenta s ustanovljenom dijagnozom virusnog oštećenja jetre;
- u dijagnostici mješovite etiologije hepatitisa;
- ako je potrebno, odrediti količinu virusa u pacijenta.
Budući da se metoda enzimske imunotestove koristi u većoj mjeri u praksi specijalista za infektivne bolesti, neki bolesnici s blagom bolešću mogu se liječiti bez potrebe za brojanjem virusnog opterećenja. Međutim, PCR se općenito smatra “zlatnim standardom” dijagnostike u hepatologiji, budući da zbog jedinstvenosti rezultata uklanja niz organizacijskih problema. Stoga, smjer pacijenta za kvantitativnom analizom ima sljedeće ciljeve:
- dobivanje podataka o broju virusnih čestica u krvi pacijenta;
- potvrda akutnog tijeka hepatitisa i pravovremena provjera kronične bolesti;
- konstantno otkrivanje latentnih nosača virusa s pozitivnim ELISA testovima, praćenje njihove viremije;
- odlučivanje o imenovanju antivirusnog liječenja, njegovoj kombinaciji i prestanku.
Najvažniji cilj primjene kvantitativnog PCR testa za otkrivanje HBV je identificirati moguće kombinacije liječenja. U slučajevima visokog virusnog opterećenja, rezultat analize daje stručnjaku mogućnost da nastavi s kombinacijom lijekova. Tijekom terapije lako je odrediti učinkovitost propisanog farmakološkog liječenja na temelju rezultata PCR-a. Vođeni samo podacima o metodama imunološkog ispitivanja, nemoguće je pravovremeno utvrditi činjenicu liječenja i njegovu trenutnu učinkovitost. Stoga je kvantitativni test u stvarnom vremenu nužna analiza prije početka liječenja akutnog hepatitisa, latentne infekcije virusom s visokom viremijom i kroničnog HBV-a.
Interpretacija kvantitativnih rezultata PCR testa
Tumačenje rezultata kvantitativnog PCR testa treba provesti liječnik pacijenta. Potrebno je procijeniti dijagnostički pokazatelj i odrediti terapijsku taktiku.
Standardni analizator može proizvesti kvantitativni pokazatelj koji odražava broj kopija virusne DNA prisutne u ispitivanom venskom krvi. Mjerne jedinice - kopije / ml, IU / ml (kopije po mililitru, međunarodne jedinice po mililitru). Tumačenje rezultata dano je u tablici s naznakom različitih mjernih jedinica.
Dešifriranje krvnog testa za hepatitis B
Hepatitis B je jedna od najopasnijih bolesti našeg vremena.
To je uzrokovano virusom koji ulazi u tijelo kada krv dođe u kontakt sa zaraženim biološkim materijalom, uključujući i one koje ostaju na manikiru, medicinskim instrumentima, strojevima za tetoviranje koji nisu dezinficirani na odgovarajući način. Virus se također može prenositi seksualnim kontaktom.
Hepatitis B se analizira radi dijagnosticiranja bolesti uzimanjem pacijentove krvi.
Infekcija se odvija putem spolnih i domaćih putova, vrsta širenja je hematogena (kroz krv). Kada je zaražen, virus ulazi u hepatocite (stanice jetre), koje se proizvode u budućnosti. Kroz krvotok, bolest se brzo širi po cijelom tijelu. Virus B (HBV) karakterizira visoka otpornost na učinke temperature i kiseline, te je u stanju održati svoj štetni učinak šest mjeseci.
Koje krvne pretrage imate za hepatitis B?
Ako su hepatitis B pokazali prve simptome, potrebno je proći testove prije početka terapije i liječenja. Test krvi je pouzdan način instaliranja hepatitis infekcije. Provodi se u laboratoriju. Materijal za testiranje hepatitisa B daje se na prazan želudac: mora proći najmanje 8 sati od posljednjeg obroka.
Da bi se otkrio virus hepatitisa B u krvi, koriste se testovi tri vrste koji karakteriziraju prisutnost virusa u krvi:
- analizu prisutnosti HBV DNA u materijalu proučavanjem lančane reakcije polimeraze;
- kvalitativno proučavanje prisutnosti anti-HBc IgG proteina i HBsAg antigena (pronađeno kod zdravih, inficiranih i bolesnih);
- analiza za detekciju proteina HBeAg i Anti-HBc IgM (karakterizira pogoršanje bolesti).
Za potpunost, preporuča se istodobno provesti istraživanje na nekoliko markera.
Imunološki testovi na hepatitis B
Najčešći testovi za hepatitis B su imunološki. Njihova je bit otkrivanje antitijela u krvi koju proizvodi tijelo ili jetra. Uzorci su kvalitativni i kvantitativni. Testovi hepatitisa B i transkripti obično sadrže informacije o nekoliko karakterističnih proteina. Tijekom ispitivanja, testirana su sljedeća antitijela:
Pojavljuje se u ranim stadijima infekcije prije pojave kliničkih znakova.
Pozitivni marker ukazuje na prisutnost virusa, ali se također nalazi u potpuno zdravih ljudi. Ako je u krvi prisutno manje od 0,05 IU / ml, rezultat se smatra negativnim. Ako je koncentracija antitijela veća, analiza se smatra pozitivnom.
Nalazi se u gotovo svakom zaraženom pacijentu. Držanje pokazatelja na visokoj razini može ukazivati na prijelaz bolesti u kronični oblik. Pozitivni marker ukazuje na prisutnost bolesti u razdoblju pogoršanja, produljenog oporavka. HBeAg je izuzetno loš znak. Pacijent je vrlo zarazan. Normalno, protein nije otkriven u krvi.
Postoje dva tipa anti-HBc antitijela: IgG i IgM. Prisutnost IgM u krvi je znak tijeka akutnog oblika, visoka infektivnost pacijenta i mogućnost bolesti pererohoda u kroničnom obliku. Uobičajeno, prisustvo IgM nije dopušteno. IgG je povoljan pokazatelj. Oznaka označava da je tijelo formiralo imunitet protiv hepatitisa B.
Ako se marker detektira u krvi, može se zaključiti o povoljnom tijeku bolesti i nastanku zaštitnog imuniteta kod pacijenta.
- Anti-HBs.
Marker signalizira oporavak i stvaranje imuniteta.
Detekcija HBV DNA pomoću PCR
Za laboratorijsko ispitivanje i otkrivanje dijagnoze hepatitisa B u krvi koristi se PCR metoda. Način na koji se smatra da je lančana reakcija polimeraze najsuvremenija u području otkrivanja bolesti.
Konačno dekodiranje pokazuje ima li tragova prisutnosti gena u patogenu u stanicama jetre.
Ako se tijekom istraživanja poštuju svi principi, rezultat je apsolutno točan. Metoda se koristi za dijagnozu, primjenjuje se u procesu liječenja i antivirusnoj terapiji.
- Visokokvalitetni PCR na ukupnoj razini ima samo dva značenja: "otkriveno" i "nije otkriveno". Postupak se provodi za svakog bolesnika sa sumnjom na hepatitis. Uz prosječnu osjetljivost PCR testa u rasponu od 10 do 500 IU / ml, s niskim razinama virusne DNA u krvi, neće se otkriti genski materijal.
- Kvantitativna PCR. Za razliku od kvalitativnog, to ukazuje ne samo na hepatitis B. Kvantitativna analiza pokazuje koliko je norma zdrave osobe daleko od pokazatelja pacijenta u brojčanom smislu. Metoda omogućuje procjenu stadija bolesti i propisivanje liječenja. Osjetljivost PCR testa za kvantitativno praćenje veća je nego u kvalitativnoj metodi. Osnova je broj detektirane DNA, koja je izražena u kopijama po mililitru ili IU / ml.
Osim toga, kvantitativni PCR daje uvid u učinke liječenja i ispravnost odabrane terapije. Ovisno o količini materijala virusnog gena, može se donijeti odluka da se skrati trajanje liječenja ili, obrnuto, da se proširi i ojača.
Biokemijski test krvi na hepatitis B
Potrebna je metoda biokemijske analize kako bi se dobila potpuna klinička slika tijeka bolesti. Ova dijagnostička metoda omogućuje razumijevanje rada unutarnjih organa (jetre, bubrega, žučnog mjehura, štitnjače i drugih). Dekodiranje daje razumijevanje metaboličke stope u tijelu, moguće patologije metabolizma. Detaljni pokazatelji ukazuju na nedostatak vitamina, makronutrijenata i minerala potrebnih za ljudsko zdravlje i život.
Možete testirati na hepatitis u bilo kojem drugom dijagnostičkom centru (Invitro, Gemotest, itd.). Biokemijski test krvi za otkrivanje hepatitisa B uključuje sljedeće komponente.
Kvantitativna analiza enzima ALT (AlAt)
Ovaj enzim se najčešće nalazi u povišenim koncentracijama kod akutnog i kroničnog hepatitisa. Tvar se nalazi u stanicama jetre, a organske lezije kroz krvotok ulaze u krvne žile.
Količina i koncentracija u krvi tijekom virusne bolesti stalno se mijenja, pa se istraživanje provodi najmanje jednom u četvrtini. ALT odražava ne samo aktivnost virusa hepatitisa, već i stupanj oštećenja uzrokovanog u jetri. Razina ALT-a povećava se s povećanjem količine toksičnih supstanci hepatičkog podrijetla iu prisutnosti virusa.
Kvantitativna analiza AST-enzima
Protein je sastavni dio najvažnijih organa čovjeka: jetre, živčanog tkiva, tkiva bubrega, kostura i mišića. Enzim je uključen u izgradnju najvažnijeg mišića - srca. Visoka AST kod bolesnika s hepatitisom B može signalizirati fibrozu jetre. Slična situacija se događa kada alkoholičar, droga ili bilo koja druga toksična oštećenja stanica jetre.
Pokazatelji pregrijavanja znak su oštećenja jetre na staničnoj razini. Kod postavljanja dijagnoze potrebno je uzeti u obzir omjer AST i ALT (de Rytis koeficijent). Istodobno povećanje koncentracije oba enzima znak je nekroze jetre.
bilirubin
Tvar se formira u slezeni i jetri kao rezultat raspada hemoglobina u njihovim tkivima. Ova komponenta je dio žuči. Postoje dvije proteinske frakcije: izravni bilirubin (vezan) i neizravni bilirubin (slobodni). S povećanjem bilirubina u krvi, ima smisla posumnjati na hepatitis ili drugo oštećenje jetre. To je izravno povezano s citolizom stanica jetre.
Ako se poveća količina neizravnog bilirubina, najvjerojatnije postoji lezija parenhimskog tkiva ili Gilbertov sindrom. Visoka razina bilirubina prema rezultatima analize može biti posljedica opstrukcije žučnih putova. Kada je razina bilirubina veća od 30 mikromola po litri, bolesnik pokazuje kožu, žućkastu boju, mokraća postaje mokra, a bjeloočnice mijenjaju boju.
albumin
Sinteza ovog proteina odvija se u jetri. Ako se njegova količina smanji, to ukazuje na smanjenje sinteze enzima u tijelu zbog pojave teških lezija jetrenih stanica.
Ukupni protein
Ako količina ukupnih proteina postane značajno niža od prihvaćene norme, to ukazuje na usporavanje funkcioniranja jetre.
GGT (GGTP)
Enzim koji se koristi u otkrivanju opstruktivne žutice i kolecistitisa. Povećanje razine GGT je znak toksičnog oštećenja jetre. Mogu biti izazvani kroničnim alkoholizmom i nekontroliranom uporabom droga. Protein je posebno osjetljiv na toksine i alkohol, pod njihovim utjecajem njegova aktivnost brzo raste. Održavanje visoke koncentracije GGT u krvi dugo vremena govori o ozbiljnom oštećenju jetre.
kreatinina
To je proizvod metabolizma proteina koji se javlja u jetri. Oštar pad razine signala je da se organ usporava.
Frakcije proteina
Smanjenje razine proteinskih frakcija znak je patologije jetre.
Analiza dekodiranja za hepatitis B i vrijednosti su normalne
Dijagnosticiranje hepatitisa B je kumulativno istraživanje pokazatelja. Samo njihova opsežna analiza omogućuje donošenje zaključaka o infekciji pacijenta. Razmotrite analizu dekodiranja za hepatitis B. Za usporedbu, brzina tvari u krvi.
Dešifriranje krvnog testa za hepatitis B
U medicinskom svijetu hepatitis B se smatra jednim od najopasnijih u današnje vrijeme.
Ovaj virus može prenositi na dodir sa zaraženom krvlju - to mogu biti škare za kutikulu u salonu noktiju, medicinski instrumenti, osobito instrumenti stomatologa koji nisu podvrgnuti nužnoj sterilizaciji, ili nisu izvedeni na pouzdan način. Osim toga, virus se spolno prenosi.
Kako bi se utvrdila bolest za hepatitis B, pacijent mora uzeti krv za analizu.
Kao što je gore opisano, virus se može prenositi spolno, kroz kućanstva, pripada hematogenom tipu širenja. Kada je zaražen, virus ulazi u stanice jetre i odatle počinje se širiti po cijelom tijelu. Virus se širi kroz krvožilni sustav, iznimno je otporan na temperaturu i zadržava sposobnost uništavanja živih stanica.
Koje krvne pretrage imate za hepatitis B?
U slučaju kada je osoba iskusila prve simptome bolesti hepatitisa B, odmah se obratite liječniku i testirajte se. Prilikom pregleda pacijenta, uzima se krv za testiranje. Krv se uzima na prazan želudac, a posljednji obrok mora biti prije najmanje 8 sati.
Da bi se utvrdila prisutnost bolesti u ljudskom tijelu, potrebno je napraviti tri vrste krvnih testova:
- Lančana reakcija polimeraze će pokazati postoji li HB V DNA u stanicama;
- Ispitati prisutnost proteina i antigena u krvi pacijenta;
- Analize o prisutnosti proteina ukazuju na pogoršanje bolesti.
Liječnici vrlo često provode klinička ispitivanja na nekoliko markera kako bi uspostavili cjelovitu sliku bolesti.
Imunološki testovi na hepatitis B
Tijekom tog razdoblja imunološki testovi na hepatitis B su pouzdani, a testovi su usmjereni na otkrivanje antitijela u krvi koja se formiraju u jetri. Tipično, testiranje na hepatitis B uključuje dekodiranje prikupljenih podataka pojedinačnih proteinskih stanica. Tijekom ispitivanja obratite pozornost na takva antitijela:
- HBsAg - često se mogu naći na početku infekcije, čak i prije nego što bolest ustane. Pozitivan marker ukazuje na to da je osoba zaražena, iako je bilo slučajeva pozitivnog rezultata u savršeno zdravoj osobi. Rezultati su negativni u slučaju kada u tijelu pacijenta nema više od 0,05 IU / ml, s većom koncentracijom antitijela - analiza je pozitivna.
- HBeAg - ta se antitijela nalaze u gotovo svim zaraženim pacijentima. Uz dugotrajnu visoku koncentraciju antitijela u krvi, bolest postaje kronični oblik. Pozitivni marker znači pogoršanje bolesti. Prisutnost gore spomenutih antitijela u tijelu pacijenta pokazuje da bolest napreduje i dolazi do vrhunca.
- Anti-HBc ima dva tipa antitijela - l gG i lgM. Prisutnost protutijela lgM u krvi sugerira da bolest dolazi do svoje najviše točke i da se može pretvoriti u kronični oblik. Liječnici moraju osigurati da ovo antitijelo ne povećava krvnu sliku. Srećom, lgG je dobar, to znači stvaranje imuniteta na virus hepatitisa B.
- Anti-HBe-antitijelo kaže da se bolest odvija na uobičajen način, a imunitet na hepatitis B nastaje u tijelu pacijenta.
- Anti-HBs - to znači da je pacijent zdrav i da je imunološki sustav znatno jači.
Detekcija HBV DNA pomoću PCR
Za kliničku studiju koja će vam pomoći odrediti je li pacijent zaražen virusom hepatitisa B, odaberite CRC metodu. PCR stoji za lančanu reakciju polimeraze, proučavajući je možete odrediti prisutnost virusa u tijelu.
Rezultati studije pomažu odrediti prisutnost patogena gena u stanicama jetre. Uz pravilan postupak - rezultati se smatraju pouzdanim.
- Kvalitetan RPC - pozitivan ili negativan rezultat. Ovaj postupak je obavezan za sve bolesnike sa sumnjom na infekciju hepatitisom B. U slučaju kada je virus u malim količinama u DNA stanicama, neće se otkriti.
- Kvantitativni RPC. Ova studija će pokazati ne samo prisutnost ili odsutnost virusa, već i fazu infekcije. Određivanjem stupnja bolesti možete odrediti potreban tijek medicinske terapije.
Između ostalog, ROC pomaže točno propisati liječenje, pa čak i prilagoditi doziranje lijekova. Utvrđuje se i trajanje terapije, u nekim slučajevima može se prekinuti prije vremena, a drugim pacijentima je potreban dodatni tijek rehabilitacije.
Biokemijski test krvi na hepatitis B
Da bi se stvorila cjelokupna slika infekcije i tijek bolesti, potrebno je napraviti biokemijski test krvi. Ova studija pomoći će u određivanju stanja unutarnjih organa pacijenta i njihovog funkcioniranja. Analize daju općenitu sliku metaboličkih procesa u tijelu, a također govore o brzini metabolizma.
Biokemijska analiza također će ukazati na sve vitamine i elemente u tragovima koji su potrebni za normalnu borbu tijela protiv bolesti i jačanje imunološkog sustava.
Testovi hepatitisa B mogu se uzeti u bilo kojoj klinici, privatnoj ili javnoj. Kada se virus ljudskog hepatitisa B otkrije u ljudskom tijelu, biokemijskom analizom postoje takve komponente.
Kvantitativna analiza enzima ALT (AlAt)
Ovaj enzim može se naći u visokim koncentracijama, s razvojem ili kroničnim oblikom infekcije virusom hepatitisa B. Enzim se nalazi u stanicama jetre, a zbog krvotoka širi se kroz sve posude.
Koncentracija tvari u tijelu se neprestano mijenja zbog onoga što treba provesti analize jednom u četvrtini. Zahvaljujući ALT, moguće je istražiti ne samo aktivnost virusa, nego i procijeniti stupanj njegovog negativnog učinka na jetru i organizam u cjelini.
Kvantitativna analiza AST-enzima
Protein je jedna od najvažnijih supstanci u ljudskom tijelu, iz nje se grade svi vitalni organi, uključujući i srce. Kod bolesti hepatitisa B visoka stopa AST ukazuje na fibrozu jetre.
Visoke stope ukazuju na uništavanje stanica jetre. Za konačnu dijagnozu treba razmotriti omjer AST i ALT. Uz visoku koncentraciju oba enzima razvija se nekroza jetre.
bilirubin
Hemoglobin se razgrađuje u tkivima jetre i slezene, zahvaljujući čemu se pojavljuje supstanca kao što je bilirubin. Ova komponenta je osnova žuči. Bilirubin može biti izravan i neizravan. Uz visoku koncentraciju izravnog bilirubina u krvi, moguće je utvrditi infekciju hepatitisom B ili drugim bolestima jetre.
Visoka koncentracija izravnog bilirubina u krvi govori o Gilbertovom sindromu. Osim toga, visoka koncentracija bilo kojeg bilirubina signalizira slabu prohodnost žučnih putova. Kada je zaražena hepatitisom, mokraća postaje tamna, lice i bjeloočnice postaju žute.
albumin
Albumin je protein koji se sintetizira u jetri. Uz niske razine ovog proteina u tijelu, stanice jetre su oštećene.
Ukupni protein
Smanjenje koncentracije ukupnog proteina u tijelu pacijenta ukazuje na povredu jetre.
GGT (GGTP)
Ovaj enzim se koristi od strane liječnika za otkrivanje žutice ili kolecistitisa. Povišene razine GGT-a ukazuju na toksično oštećenje jetrenih stanica koje se mogu pojaviti kao posljedica kroničnog alkoholizma ili trovanja lijekovima. Protein je izuzetno osjetljiv na alkohol i toksine, a kada su prekomjerni, aktivnost proteina se povećava.
kreatinina
Metabolizam proteina pojavljuje se u jetri, a proizvod ovog metabolizma u medicini naziva se kreatinin. Kada se razina kreatinina smanji, jetra usporava.
Frakcije proteina
Niska razina proteinskih frakcija ukazuje na jasno kršenje jetre.
Analiza dekodiranja za hepatitis B i vrijednosti su normalne
Za dijagnosticiranje virusa potrebno je provesti niz različitih studija. Rezultati svih testova u kompleksu će dati jasnu sliku bolesti.
Suština analize PCR-a za hepatitis B i njegove rezultate
Virusni hepatitis B uspješno se liječi ako se otkrije na vrijeme, a broj antitijela i antigena u krvi pacijenta je točno određen. Uz pomoć enzimskog imunotesta za hepatitis moguće je detektirati prisutnost virusnih markera, ali oni ne mogu odrediti točnu fazu procesa.
Za kvantitativnu evaluaciju korištena je PCR dijagnostika. Pomoću testa moguće je prebrojati broj markera, predvidjeti tijek bolesti i vjerojatnost izlječenja uz pomoć antivirusnih lijekova.
Glavna prednost studije je sposobnost detektiranja i minimalnih koncentracija virusa, identifikacije patogena u stadiju vrste.
Dijagnoza hepatitisa B
Virus hepatitisa B je vrlo zarazan i otporan na vanjske utjecaje. Ona ostaje aktivna u krvi pacijenta nekoliko tjedana. Stoga je svaka osoba izložena riziku od infekcije, čak i ako se promatra profilaksa.
Za dijagnosticiranje bolesti propisuju se sljedeća ispitivanja:
Bit PCR metode
Američki kemičar K.Mullis dobio je Nobelovu nagradu, a njegova dijagnostička metoda se još uvijek koristi.
Predak metode PCR (lančana reakcija polimeraze) smatra se znanstvenikom iz Norveške H. Kleppe. Najprije je počeo provoditi pojačavanje (oporavak) DNA pomoću kratkog lanca DNA, tj. Sintetičkog prajmera (vrsta kopije).
Međutim, znanstvenik nije uspio ostvariti svoju ideju. Slične studije izradio je i američki kemičar K.Mullis, koji je 1993. dobio svoj Nobelovu nagradu za svoj izum. Od tada se PCR koristi za utvrđivanje očinstva, dijagnosticiranje genetskih bolesti i otkrivanje virusa.
Suština reakcije je da se uz pomoć enzima kopira određeni dio DNA. Možete kopirati samo područje koje odgovara navedenim parametrima i ako je u prikazanom uzorku. Za početak reakcije koriste se sljedeće komponente:
- Matrica DNA s mjestom koje treba kopirati.
- Prajmeri su slični strukturi DNA.
- Polimeraza, tj. Enzim koji aktivira reakciju. Trebala bi biti termostabilna, to jest, izdržati ekstreme temperature.
- Otopina s određenim parametrima, osiguravajući prolaz reakcije.
Reakcija se provodi u nekoliko faza:
Za otkrivanje hepatitisa B koriste se dvije vrste reakcija: kvantitativna i kvalitativna.
Kvantitativna PCR
Kvantitativna metoda određuje količinu HBV genoma
Kvantitativna PCR uključuje istodobno stvaranje kopija DNA fragmenata i određivanje broja molekula. Mjerenje se provodi nakon svake faze, tj. U stvarnom vremenu. To se postiže uporabom fluorescentnih sondi, koje su uključene u lanac molekula i svijetle u određenom razdoblju istraživanja.
Ova metoda se koristi za otkrivanje fragmenata DNA koji su markeri virusa hepatitisa. Kvantitativnom metodom moguće je točno izolirati virusni genotip. Drugim riječima, izračunat je broj kopija HBV genoma po broju bolesničke stanice.
Kvantitativna analiza daje odgovore na sljedeća pitanja:
- S kojim intenzitetom bolest napreduje.
- Koliko je tretman učinkovit.
- Je li se razvila otpornost na lijekove?
Također, kvantitativno mjerenje je potrebno za dijagnozu kroničnog stadija infekcije. Ako je količina DNA ispod 100 kom / ml na normalnoj razini transaminaze, tada je osoba nositelj virusa.
U akutnoj fazi količina antitijela je mnogo veća, a antivirusnom terapijom povećanje broja antitijela ukazuje na razvoj rezistencije na lijekove, što je signal za prilagodbu liječenja.
PCR visoke kvalitete
Visokokvalitetni PCR daje manje informacija, ali može eliminirati infekciju.
Visokokvalitetni PCR može samo utvrditi prisutnost patogena u krvi. Ako ih nema, pacijent nije zaražen, a ako patogen uđe u krv, rezultat će biti pozitivan.
Međutim, uz pomoć kvalitativne reakcije nemoguće je razjasniti genom virusa, fazu bolesti. Stoga je za dijagnozu HBV-a provedeno kvantitativno i kvalitativno mjerenje.
Priprema za istraživanje
Za PCR analizu potrebna je venska krv. To se mora učiniti ujutro na prazan želudac.
Pacijent se treba pravilno pripremiti za studiju:
- Za 10 sati odbijanja hrane, možete piti samo čistu vodu.
- Uoči prestanka uzimanja alkohola, 4 sata ne pušiti.
- Prije pregleda treba izbjegavati fizički i emocionalni stres.
- Prestanite koristiti lijekove 2 dana, ako to nije moguće, potrebno je obavijestiti laboratorijskog tehničara. Neki lijekovi utječu na konačni rezultat.
Tumačenje podataka
U kvantitativnoj reakciji dobiveni pokazatelji procjenjuju se ovisno o broju kopija DNA.
Lako je interpretirati podatke o mjerenju kvalitete. On daje ili pozitivan ili negativan odgovor.
U kvantitativnoj reakciji dobiveni pokazatelji mogu se procijeniti ovisno o broju kopija DNA. Jedinica mjere je kopija / ml.
Podaci su dekodirani na sljedeći način:
- Ako je količina HBV DNA manja od 90, infekcija je odsutna. Pacijent je razvio imunitet nakon cijepljenja ili je izliječen od bolesti.
- Kada broj primjeraka 2x100 govori o nosiocu virusa.
- Broj 2x106 ukazuje na kronični stadij bolesti.
- Kod DNA više od 2x109, pacijent ima akutni stadij hepatitisa.
Pogrešni rezultati
Prednosti dijagnostičke metode pomoću polimeraznih reakcija su sljedeće:
- Izravno otkrivanje patogena. Nasuprot tome, ELISA daje informacije o prisutnosti antitijela na virus.
- Specifičnost. To jest, DNA regija je prisutna u uzorku biomaterijala koji se kopira.
- Preosjetljivost. Metoda može čak otkriti fragmente pojedinačnih stanica.
- Dijagnoza bolesti u akutnoj i latentnoj fazi. Naime, moguće je dijagnosticirati bolest u fazi pretkliničkih manifestacija.
Metoda ima nedostatke koji dovode do pogrešnih rezultata. Najznačajniji nedostatak je vjerojatnost kontaminacije materijala. Glavni izvor kontaminacije su slabo obrađene epruvete, laboratorijske ruke, reagensi.
Dio DNA iz prethodne reakcije može ući u krv. Zbog toga laboratoriji imaju povećane sanitarne zahtjeve: zasebne prostorije, plastične cijevi, ultraljubičasto liječenje laboratorija itd.
Lažno negativni rezultati mogu biti posljedica smanjene osjetljivosti reakcije. To se događa u sljedećim situacijama:
- pacijent uzima lijekove, na primjer, antikoagulanse;
- osoba je pretrpjela fizički stres prije analize (igranje sporta, naporan rad);
- nedavno se pojavila infekcija.
Ako pacijent ima visoku vjerojatnost infekcije, a rezultat istraživanja je negativan, treba ga ponovno ispitati.
Pogledajte i:
zaključak
Metoda lančane reakcije polimeraze je glavna i najinformativnija za dijagnozu HBV. To omogućuje ne samo da se utvrdi status nositelja infekcije, već i da se razjasni stadij bolesti, da se ocijene rezultati liječenja.
Za točniju dijagnozu koristi se kvalitativno i kvantitativno mjerenje. Nedostaci metode uključuju vjerojatnost kontaminacije, smanjenu osjetljivost i prilično visoku cijenu.
Da bi rezultati bili najpouzdaniji, treba se pravilno pripremiti za proučavanje i provesti ga u klinici s odgovarajućom licencom i dobrom reputacijom.