PCR za hepatitis B

Dostupnost suvremenih lijekova protiv hepatitisa B (HBV) s jasnim indikacijama za njihovu primjenu zahtijeva točnu i brzu provjeru dijagnoze. Međutim, zbog oskudnih kliničkih podataka u prvim tjednima bolesti i ograničenih imunoloških metoda analize, stopa dijagnoze se smanjuje.

Prisutnost biljega anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe omogućuje potvrdu HBV-a ili utvrđivanje činjenice prethodne bolesti. No, moguće je odrediti prisutnost aktivnih virusnih čestica u krvi i brojati ih u vrijeme ispitivanja pomoću PCR-a - kvantitativni test u stvarnom vremenu za otkrivanje hepatitisa B. Metoda, u usporedbi s dijagnostičkim metodama ELISA, rješava dijagnostičke probleme i omogućuje predviđanje tijeka bolesti tijekom primanja. antivirusni lijekovi.

Osnove dijagnoze bolesti

Dijagnoza hepatitisa B temelji se na procjeni kliničkih manifestacija, enzimskih imunotestova i instrumentalnih metoda istraživanja. Bolest se nastavlja u akutnoj fazi nakon perioda inkubacije i, ovisno o dozi infekcije i djelotvornosti liječenja, ulazi u kroničnu fazu. Glavni cilj liječenja je spriječiti kroničenje, odnosno eliminaciju svih virusnih čestica iz krvi. Klinički tijek bolesti je lijek bez naknadne viremije.

Činjenicu eliminacije infekcije treba dokazati kvantitativnom metodom istraživanja.

Budući da bilo koji kvalitativni enzimski imunotest omogućuje indirektno dijagnosticiranje HBV-a, tj. Ne pokazuje prisutnost patogena u unutarnjem okruženju tijela, karakterizira imunološki odgovor na infekciju, praćenje učinkovitosti terapije i činjenica da je liječenje teško dokazati. Dakle, bolesnik s hepatitisom B ili uz prisutnost dijagnostičkih kriterija u svoju korist treba provesti lančanu reakciju polimeraze kako bi se kvantificirao broj virusnih čestica u krvi. Dijagnostička brzina je nedostatak kopija DNA infekcije.

Opis dijagnostičke metode

Vrlo osjetljiva metoda PCR dijagnoze hepatitisa B spada u kategoriju genetski modificiranih molekularno-bioloških studija. Kroz njega se određuje količina virusne DNA u biološkom materijalu pacijenta i dopuštena brzina. Prema dobivenim rezultatima utvrđuje se broj virusnih čestica po jedinici volumena. Materijal za dijagnostički test je venska krv pacijenta. Unos je poželjan na prazan želudac zbog mogućeg učinka chyle seruma na rezultat istraživanja.

Dobiveni rezultati moraju se dati liječniku za tumačenje i određivanje daljnje taktike. Nezavisno dekodiranje ne predstavlja dijagnostičku vrijednost.

Značaj rezultata broja čestica virusa dobivenih PCR metodom premašuje vrijednost imunotestova enzima. Budući da analiza u načinu rada u stvarnom vremenu pokazuje prisutnost uzročnika bolesti u krvi, njegov je sadržaj informacija viši od drugih. Ako ELISA ukazuje samo na prisutnost antitijela, koja se promatra od 4 tjedna inkubacije i traje više od 8 tjedana nakon eliminacije virusa iz krvi, onda lančana reakcija polimeraze jasno potvrđuje aktivni tijek bolesti ili njezino izlječenje, karakterizira dinamiku propisane terapije.

Lančana reakcija polimeraze s kvantitativnim određivanjem čestica patogena rješava dijagnostička pitanja u korist zaustavljanja liječenja zbog oporavka ili kontinuirane terapije zbog nedostatka učinkovitosti. Metoda je što je moguće specifičnija za HBV virus i odlikuje se prihvatljivom pogreškom.

Indikacije i ciljevi izvedbe

Kvantitativna analiza hepatitisa B je najpouzdanija i omogućuje potvrdu podataka dobivenih ELISA metodama. Imenovan je kada:

1. dobivanje pozitivnog dijagnostičkog rezultata ELISA;
2. liječenje pacijenta s ustanovljenom dijagnozom virusnog oštećenja jetre;
3. u dijagnostici mješovite etiologije hepatitisa;
4. ako je potrebno, odrediti količinu virusa u pacijenta.

Budući da se metoda enzimske imunotestove koristi u većoj mjeri u praksi specijalista za infektivne bolesti, neki bolesnici s blagom bolešću mogu se liječiti bez potrebe za brojanjem virusnog opterećenja. Međutim, PCR se općenito smatra “zlatnim standardom” dijagnostike u hepatologiji, budući da zbog jedinstvenosti rezultata uklanja niz organizacijskih problema. Stoga, smjer pacijenta za kvantitativnom analizom ima sljedeće ciljeve:

• dobivanje podataka o broju virusnih čestica u krvi pacijenta;
• potvrda akutnog tijeka hepatitisa i pravovremena provjera kronične bolesti;
• konstantno otkrivanje latentnih nosača virusa s pozitivnim ELISA testovima, praćenje njihove viremije;
• odlučivanje o imenovanju antivirusnog liječenja, njegovoj kombinaciji i prestanku.

Najvažniji cilj primjene kvantitativnog PCR testa za otkrivanje HBV je identificirati moguće kombinacije liječenja. U slučajevima visokog virusnog opterećenja, rezultat analize daje stručnjaku mogućnost da nastavi s kombinacijom lijekova. Tijekom terapije lako je odrediti učinkovitost propisanog farmakološkog liječenja na temelju rezultata PCR-a. Vođeni samo podacima o metodama imunološkog ispitivanja, nemoguće je pravovremeno utvrditi činjenicu liječenja i njegovu trenutnu učinkovitost. Stoga je kvantitativni test u stvarnom vremenu nužna analiza prije početka liječenja akutnog hepatitisa, latentne infekcije virusom s visokom viremijom i kroničnog HBV-a.

Interpretacija kvantitativnih rezultata PCR testa

Tumačenje rezultata kvantitativnog PCR testa treba provesti liječnik pacijenta. Potrebno je procijeniti dijagnostički pokazatelj i odrediti terapijsku taktiku.

Standardni analizator može proizvesti kvantitativni pokazatelj koji odražava broj kopija virusne DNA prisutne u ispitivanom venskom krvi. Mjerne jedinice - kopije / ml, IU / ml (kopije po mililitru, međunarodne jedinice po mililitru). Tumačenje rezultata dano je u tablici s naznakom različitih mjernih jedinica.

Studije o virusu hepatitisa B (ELISA i PCR)

Antigen hepatitis B virusa (HBsAg)

Površinski antigen hepatitisa B u serumu je normalno odsutan.
Detekcija površinskog antigena hepatitisa B (HBsAg) u serumu potvrđuje akutnu ili kroničnu infekciju virusom hepatitisa B.

U akutnoj bolesti, HBsAg se detektira u serumu u posljednjih 1-2 tjedna inkubacijskog razdoblja i prvih 2-3 tjedna kliničkog razdoblja. Kruženje HBsAg-a u krvi može biti ograničeno na nekoliko dana, tako da biste trebali težiti ranom početnom pregledu pacijenata. Metoda ELISA omogućuje otkrivanje HBsAg u više od 90% bolesnika. Gotovo u 5% bolesnika, najosjetljivije metode istraživanja ne otkrivaju HBsAg, u tim slučajevima etiologiju virusnog hepatitisa B potvrđuje prisutnost anti-HBcAg JgM ili PCR.

Koncentracija HBsAg u serumu u svim oblicima ozbiljnosti hepatitisa B u visini bolesti ima značajan raspon fluktuacija, međutim, postoji određeni obrazac: u akutnom razdoblju postoji inverzni odnos između koncentracije HBsAg u serumu i ozbiljnosti bolesti.

Visoke koncentracije HBsAg češće su u blagim i umjerenim oblicima bolesti. U teškim i zloćudnim oblicima koncentracija HBsAg u krvi je često niska, a kod 20% bolesnika s teškim oblikom i 30% s malignim antigenom u krvi uopće se ne može otkriti. Pojava na toj pozadini u bolesnika s antitijelima na HBsAg smatra se nepovoljnim dijagnostičkim znakom; određuje se u malignim oblicima hepatitisa B.

U akutnom tijeku hepatitisa B koncentracija HBsAg u krvi postupno se smanjuje do potpunog nestanka ovog antigena. HBsAg nestaje kod većine bolesnika unutar 3 mjeseca od početka akutne infekcije.

Smanjenje koncentracije HBsAg za više od 50% do kraja trećeg tjedna akutnog razdoblja, u pravilu, ukazuje na bliski završetak procesa infekcije. Obično se u bolesnika s visokom koncentracijom HBsAg u visini bolesti otkriva u krvi nekoliko mjeseci.
U bolesnika s niskim koncentracijama HBsAg nestaje mnogo ranije (ponekad nekoliko dana nakon početka bolesti). Općenito, vrijeme detekcije HBsAg se kreće od nekoliko dana do 4-5 mjeseci. Maksimalno razdoblje otkrivanja HBsAg s glatkim tijekom akutnog hepatitisa B ne prelazi 6 mjeseci od početka bolesti.

HBsAg se može naći u zdravih ljudi, u pravilu, u profilaktičkim ili slučajnim studijama. U takvim slučajevima pregledavaju se drugi markeri virusnog hepatitisa B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg i istražuje se funkcija jetre.

U slučaju negativnih rezultata, potrebna su ponavljana ispitivanja na HBsAg.
Ako se ponovljenim krvnim testovima tijekom više od 3 mjeseca otkriju HBsAg, taj je pacijent klasificiran kao kronični bolesnik s virusnim hepatitisom B.
Prisutnost HBsAg je vrlo česta. U svijetu ima više od 300 milijuna prijevoznika, au našoj zemlji ima oko 10 milijuna prijevoznika.
Prestanak HBsAg cirkulacije i naknadna serokonverzija (stvaranje anti-HBs) uvijek ukazuje na sanaciju tijela.

Test krvi na prisutnost HBsAg koristi se u sljedeće svrhe:

za dijagnozu akutnog hepatitisa B:

• razdoblje inkubacije;
• akutna bolest;
• rani oporavak;
  

za dijagnozu kroničnog virusnog hepatitisa B;

za bolesti:

• uporni kronični hepatitis;
• ciroza jetre;

za pregled i identifikaciju pacijenata u rizičnim skupinama:

bolesnika s čestim hemotransfuzijama;

bolesnika s kroničnim zatajenjem bubrega;

bolesnika s višestrukom hemodijalizom;

bolesnika sa stanjem imunodeficijencije, uključujući AIDS.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultati istraživanja izraženi su kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsustvo HBsAg u serumu. Pozitivan rezultat - identifikacija HBsAg ukazuje na inkubaciju ili akutno razdoblje akutnog virusnog hepatitisa B, kao i na kronični virusni hepatitis B.

Antitijela na nuklearni antigen virusa hepatitisa B JgG (anti-HBcAg JgG)

Normalno, serumski anti-HBcAg nije prisutan u serumu.
U bolesnika s anti-HBcAg JgG pojavljuju se u akutnom razdoblju virusnog hepatitisa B i traju tijekom cijelog života. Anti-HBcAg JgG je vodeći marker prenesenog HBV.

Testovi krvi za anti-HBcAg JgG se koriste za dijagnosticiranje:

kronični virusni hepatitis B u prisutnosti HBs antigena u serumu;

virusni hepatitis B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost serumskog anti-HBcAg JgG. Pozitivan rezultat - identifikacija anti-HBcAg JgG ukazuje na akutnu infekciju, oporavak ili ranije preneseni virusni hepatitis B.

Antigen antitijela "e" virusa hepatitisa B (HBeAg)

Normalno, HBeAg u serumu je odsutan.
HBeAg se može naći u serumu većine bolesnika s akutnim virusnim hepatitisom B. Obično nestaje u krvi prije HBs antigena. Visoka razina HBeAg u prvim tjednima bolesti ili njeno otkrivanje više od 8 tjedana daje razlog za sumnju na kroničnu infekciju.

Taj se antigen često otkriva u kroničnom aktivnom hepatitisu virusne etiologije. Od posebnog interesa u definiciji HBeAg je činjenica da njegova detekcija karakterizira aktivnu replikativnu fazu infektivnog procesa. Utvrđeno je da visoke koncentracije HBeAg odgovaraju visokoj aktivnosti DNA polimeraze i karakteriziraju aktivnu replikaciju virusa.

Prisustvo HBeAg u krvi ukazuje na njegovu visoku infektivnost, tj. ispituje se prisutnost aktivne infekcije hepatitisom B u tijelu, a detektira se samo u prisutnosti HBs antigena u krvi. U bolesnika s kroničnim aktivnim hepatitisom, antivirusni lijekovi koriste se samo kada je HBeAg detektiran u krvi. HBeAg - antigen - marker akutne faze i replikacije virusa hepatitisa B.

Za dijagnosticiranje koristi se test krvi na prisutnost antigena HBe:

period inkubacije virusnog hepatitisa B;

prodromalno razdoblje virusnog hepatitisa B;

akutno razdoblje virusnog hepatitisa B;

kronični perzistentni virusni hepatitis B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost HBeAg u serumu. Pozitivan rezultat - otkrivanje HBeAg ukazuje na inkubaciju ili akutno razdoblje akutnog virusnog hepatitisa B ili na kontinuiranu replikaciju virusa i infektivnost pacijenta.

Antitijela na antigen "e" virusa hepatitisa B (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg u serumu je normalno odsutan. Pojava anti-HBeAg protutijela obično ukazuje na intenzivno uklanjanje virusa hepatitisa B i manje infekcije pacijenta.

Ta se antitijela pojavljuju u akutnom razdoblju i traju do 5 godina nakon infekcije. Kod kroničnog perzistentnog hepatitisa, anti-HBeAg nalazi se u krvi bolesnika zajedno s HBsAg. Serokonverzija, tj. prijelaz HBeAg na anti-HBeAg, s kroničnim aktivnim hepatitisom, češće prognostički povoljnim, ali ista serokonverzija ne poboljšava prognozu ozbiljne cirotične transformacije jetre.

Testovi krvi na prisutnost anti-HBeAg koriste se u sljedećim slučajevima u dijagnostici virusnog hepatitisa B:

utvrđivanje početnog stupnja bolesti;

akutna infekcija;

rani oporavak;

oporavak;

kasna faza oporavka.

dijagnoza nedavno prenesenog virusnog hepatitisa B;

dijagnoza kroničnog perzistentnog virusnog hepatitisa B.

Evaluacija rezultata istraživanja

Rezultat studije izražen je kvalitativno - pozitivno ili negativno. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost antitijela na HBeAg u serumu. Pozitivan rezultat je otkrivanje antitijela na HBeAg, što može ukazivati ​​na početni stadij akutnog virusnog hepatitisa B, akutno razdoblje infekcije, rani stadij oporavka, oporavak, nedavno prenijeti virusni hepatitis B ili perzistentni virusni hepatitis B.

Kriteriji za prisutnost kroničnog hepatitisa B su:

otkrivanje ili periodično otkrivanje HBV DNA u krvi;

kontinuirano ili povremeno povećanje aktivnosti ALT / AST u krvi; t

morfološki znakovi kroničnog hepatitisa u histološkom ispitivanju biopsije jetre.

Detekcija virusa hepatitisa B PCR-om (kvalitativno)

Virus hepatitisa B u krvi je obično odsutan.
Kvalitativno određivanje virusa hepatitisa B metodom PCR u krvi omogućuje potvrđivanje prisutnosti virusa u tijelu pacijenta i time utvrđuje etiologiju bolesti.

Ova studija pruža korisne informacije za dijagnozu akutnog virusnog hepatitisa B u inkubacijskim i ranim razvojnim stadijima bolesti, kada glavni pacijenti mogu biti odsutni. Serumska virusna DNA detektirana je u 50% bolesnika u odsutnosti HBeAg. Analitička osjetljivost PCR metode je ne manje od 80 virusnih čestica u 5 μl, posljednji DNK uzorak, specifičnost - 98%.

Ova metoda je važna za dijagnosticiranje i praćenje tijeka kroničnog HBV-a. Oko 5-10% slučajeva ciroze i drugih kroničnih bolesti jetre uzrokovano je kroničnim nositeljem virusa hepatitisa B. Markeri aktivnosti takvih bolesti su prisutnost HBeAg i DNA virusa hepatitisa B u krvi.

Metoda PCR omogućuje određivanje DNK virusa hepatitisa B u krvi i kvalitativno i kvantitativno. Određeni fragment u oba slučaja je jedinstveni DNA slijed gena strukturnog proteina virusa hepatitisa B.

Detekcija DNA virusa hepatitisa B u biomaterijalu pomoću PCR-a neophodna je za:

razlučivanje upitnih rezultata seroloških testova;

otkrivanje akutnog stadija bolesti u usporedbi s prethodnom infekcijom ili kontaktom;

kontrolirati učinkovitost antivirusnog liječenja.

Nestanak hepatitis B DNA iz krvi znak je učinkovitosti terapije

Detekcija virusa hepatitisa B PCR-om (kvantitativno)

Ova metoda daje važne informacije o intenzitetu razvoja bolesti, učinkovitosti liječenja i razvoju otpornosti na aktivne lijekove.
Za dijagnozu virusnog hepatitisa PCR-om u serumu koriste se testni sustavi čija je osjetljivost 50-100 primjeraka u uzorku, što omogućuje detekciju virusa u koncentraciji od 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopije / ml. PCR u virusnom hepatitisu B je svakako neophodan za procjenu virusne replikacije.

Serumska virusna DNA detektirana je u 50% bolesnika u odsutnosti HBeAg. Serum krvi, limfociti i hepatobiopsija mogu poslužiti kao materijal za otkrivanje DNA virusa hepatitisa B.

• Ocjena razine viremije je sljedeća:
• manje od 2.10 ^ 5 kopija / ml (manje od 2.10 ^ 5 IU / ml) - niska viremija;
• od 2.10 ^ 5 kopija / ml (2.10 ^ 5 IU / ml) do 2.10 ^ 6 kopija / ml (8.10 ^ 5 IU / ml) - srednja viremija;
• više od 2,10 ^ 6 kopija / ml - visoka viremija.

Postoji veza između ishoda akutnog virusnog hepatitisa B i koncentracije HBV DNA u krvi pacijenta. Uz nisku razinu viremije, proces kroničenja infekcije je blizu nule, s prosječnim, proces je kroničen u 25-30% bolesnika, a uz visoku razinu viremije, akutni virusni hepatitis B najčešće postaje kroničan.

Indikacije za liječenje kroničnog HBV interferona alfa treba uzeti u obzir kao prisutnost biljega aktivne virusne replikacije (otkrivanje HBV HBV, HBeAg i HBV DNA u krvnom serumu tijekom prethodnih 6 mjeseci).

Kriteriji za procjenu učinkovitosti liječenja su nestanak HBEAg i HBV DNA u krvi, što je obično popraćeno normalizacijom razine transaminaza i dugoročnom remisijom bolesti, HBV DNA nestaje iz krvi do 5. mjeseca liječenja u 80% bolesnika. Smanjenje razine viremije za 85% ili više do trećeg dana od početka liječenja u usporedbi s početnim je brz i prilično točan kriterij za predviđanje učinkovitosti terapije.

PCR analiza za hepatitis B

DNA virus obitelji Hepadnaviridae je izravni uzročnik hepatitisa B. PCR analiza hepatitisa B omogućuje da se u krvi pacijenta otkrije prisutnost zaraženog DNA virusa. Rezultat pozitivnog tipa na HBV DNA pokazuje prisutnost infekcije u krvi pacijenta. Treba napomenuti da dijagnoza pomoću PCR analize omogućuje ne samo da se utvrdi prisutnost infekcije, već i njezino kvantitativno opterećenje i aktivnost. Ova metoda je pouzdana, točna i ponovljiva. Kvantificiranje HBV DNA pomoću qPCR-a može se koristiti za praćenje učinkovitosti HBV terapije i korisno za razumijevanje prirodne povijesti HBV u endemskom području.

Proces infekcije hepatitisom B nastaje putem kućnog ili seksualnog kontakta - izravnim kontaktom sa zaraženom krvlju. Nakon infekcije, virus ulazi u stanice jetre, u kojima nastavlja svoju aktivnu reprodukciju. Kroz krvotok, patogene se stanice šire po cijelom tijelu. Valja napomenuti da su hepatitis B stanice vrlo otporne na kiseline i visoke temperature. On je u stanju održati svoj štetni učinak šest mjeseci.

Vrste PCR-a za hepatitis B

Do danas postoje dvije vrste dijagnostike koje se propisuju ako sumnjate na prisutnost virusa hepatitisa B: kvalitativni PCR (omogućuje vam da sa 100% točnosti utvrdite prisutnost virusa u krvi) i kvantitativnu PCR (omogućuje vam određivanje stupnja aktivnosti virusa).

Visokokvalitetni PCR propisuje se ako postoji sumnja na HBV infekciju ili ako druge dijagnostičke metode nisu dale jasne rezultate. Ovaj tip PCR analize je vrlo jednostavan za dešifriranje: negativan (nema virusa u krvi), pozitivan (virus detektiran u krvi). Glavni zadatak kvalitativne analize je utvrditi prisutnost inficiranih stanica u ranim stadijima bolesti. Ako je virus dijagnosticiran dva tjedna nakon navodne infekcije, učinkovitost liječenja bit će mnogo veća. Ako je virus u krvi oko dva mjeseca, bolest postaje kronična, stoga se ne može u potpunosti izliječiti.

Ako kvalitativna dijagnoza potvrdi prisutnost HBV u krvi, liječnik propisuje kvantitativnu analizu.

Kvantitativna analiza omogućuje određivanje aktivnosti razvoja virusa u tijelu pacijenta. Ova vrsta PCR analize dodijeljena je:

• odrediti stadij bolesti;
• pratiti učinkovitost primijenjene terapije;
• odrediti razinu otpornosti virusa na određeni lijek;
• za odabir lijekova.

Kvantitativni pokazatelji virusa u krvi mjere se u IU po mililitru ili DNA po mililitru.

Ako liječnik odmah odredi kvantitativnu dijagnozu, bez provjere kakvoće, stopa iznosi 75 IU po mililitru. Ako se otkrije manje međunarodnih jedinica, rezultat je da se HBV ne otkrije kada su brojke iznad normale, dijagnosticira se prisutnost virusnog hepatitisa B.

Tumačenje kvantitativne dijagnoze

Sljedeći pokazatelji (u kopijama / mililitru) smatraju se normom CRP-a kod hepatitisa B: manje od 10 3 - neaktivnog virusa; od 10 4 do 10 5 - virus je obično neaktivan; - aktivni virus; - virus u visokom stupnju aktivnosti.

Na temelju kvantitativnih pokazatelja može se sa 100% točnosti odrediti oblik bolesti (nosač, akutni ili kronični), reakcija virusa na liječenje, potreba za dodatnom dijagnostikom.

Kronični oblik hepatitisa B utvrđuje se ako je aktivnost virusa 10 5 kopija po mililitru. Nositelj se dijagnosticira ako su rezultati ispod 10 5 kopija po mililitru.

Tijekom razdoblja liječenja potrebno je redovito (jednom svaka tri mjeseca) ponoviti kvantitativnu dijagnostiku kako bi se u vremenu uzelo u obzir razdoblje u kojem virus razvija imunitet na korištene lijekove i mijenja metodu. Ako su sva ispitivanja provedena ispravno i odabran je učinkovit tretman, ponovljena analiza (nakon tri dana liječenja) pokazat će smanjenje aktivnosti patogenih stanica za najmanje osamdeset i pet posto.

Biopsija jetre provodi se samo u slučaju kada je šest mjeseci liječenja pokazalo da su razine ALT-a dvaput veće od normalne, a PCR dijagnostika pokazuje stope niže od 10 5 primjeraka po mililitru krvi.

Priprema za istraživanje

Za analizu je potrebna venska krv. Da bi se dobili najtočniji rezultati, potrebno je pripremiti se za postupak: odbiti hranu najmanje osam sati prije uzimanja krvi; na dva dana odbiti liječenje lijekovima (neophodno je upozoriti liječnika o uzimanju lijekova); morate provesti dvadeset minuta u mirovanju prije davanja krvi; Dvanaest sati prije zahvata odustati od sportskih vježbi, alkoholnih pića, pušenja i jedenja masne hrane.

Važno je: ako je dijagnoza neophodna za dijete mlađe od pet mjeseci, onda treba dati čašu prokuhane vode svakih deset minuta šezdeset minuta prije postupka prikupljanja krvi.

Ukratko

PCR analiza za hepatitis B danas je najpreciznija metoda za dijagnosticiranje virusa. Metoda omogućuje određivanje mutiranih i skrivenih oblika bolesti, dijagnosticiranje bolesti u prvim danima infekcije, dakle, odabir najučinkovitijeg liječenja. Laboratorijski suradnik uspoređuje rezultate analize s normom, a zatim ih dovodi do zaključka. Podaci se obrađuju unutar dva tjedna. Da bi dobili uputnicu za PCR analizu, potrebno je kontaktirati hepatologa, specijaliste za infektivne bolesti ili virologa. Važno je upamtiti da što prije dođete do liječnika, rezultati će se brže dobiti, stoga će učinkovitije liječenje biti.

Objašnjenje PCR i biokemijske analize hepatitisa

Hepatitis je upalni proces u jetri koji nastaje uništavanjem njegovih stanica otrovnim tvarima. Dešifriranjem analize za hepatitis moguće je objektivno procijeniti zdravstveno stanje pacijenta koji boluje od bolesti jetre. Liječnik infektivnih bolesti reći će vam kako razumjeti rezultate istraživanja i propisati daljnje liječenje. Pacijent, nezavisno proučavajući dobivene podatke, izvlači određene zaključke, koji ne odgovaraju uvijek stvarnosti.

Virus hepatitisa B sadržan je u serumu, a specifične laboratorijske dijagnostičke metode omogućuju otkrivanje patogenih antigena i antitijela na njega.

Popis testova na hepatitis

Dijagnozu virusne upale jetre potvrđuju posebne studije. Prije provedbe terapije, pacijent se testira:

1. Pacijent daje krv za istraživanje ujutro, između 7 i 9 sati. Pacijent se treba suzdržati od jela 12 sati. Kvantitativna analiza hepatitisa B određuje prisutnost virusa i titar antitijela u serumu. Istodobno, liječnik propisuje studiju koja identificira HBV DNA pomoću PCR reakcija.
2. U zaraženih bolesnika ustanovljena je prisutnost Anti-HBc IgG proteina i HBsAg antigena. Specifični imunoglobulin ukazuje na brzo povećanje koncentracije virusa hepatitisa u serumu pacijenta. U slučaju negativnog testa na Anti-HBc, IgG se provodi dodatna istraživanja o prisutnosti drugih bolesti.
3. Proučavajući razdoblje akutne bolesti, odredite imunoglobuline HBeAg i Anti-HBc IgM. Utvrđivanje ispravne dijagnoze moguće je tek nakon otkrića virusne RNA - hepatitisa, što je potvrđeno molekularno-biološkom metodom.
4. PCR se naširoko koristi za dijagnosticiranje bolesti jetre - kvantitativna metoda omogućuje propisivanje učinkovitog liječenja hepatitisa.

Imunološka studija

Da bi se utvrdila sposobnost pacijenta da se nosi s opasnim virusom, dijagnosticira razinu otpornosti tijela. Zbog čitavog niza laboratorijskih ispitivanja utvrđeni su kvantitativni i kvalitativni pokazatelji imunoloških čimbenika - antitijela na hepatitis B.

HBsAg protein je površinski antigen koji je komponenta superkapsida (virusne ovojnice) patogena. Njegova glavna funkcija je sudjelovanje u procesu adsorpcije virusa u zdravim stanicama jetre. HBsAg peptid je otporan na čimbenike okoline - alkalije (Ph = 10), 2% otopinu kloramina i fenola.

Marker HBsAg prisutan je u serumu zaražene osobe. Odmah nakon pojavljivanja, RNA ne samo da prevodi svoju sintezu, već sadrži i jezgre Ar čestica prethodnog markera. To je dokaz razvoja aktivne faze hepatitisa.

Prisutnost HBeAg u kroničnog bolesnika ukazuje na početak aktivne faze infektivnog procesa.

Anti-HBc marker sadrži 2 tipa antitijela - IgG i IgM. To je protein specifičan za jedan antigen. Akutni oblik bolesti karakteriziran je prisutnošću Anti-HBc i IgM. Njihova pozitivna vrijednost ukazuje na prethodnu bolest jetre.

Kvantitativna analiza

Za određivanje aktivnosti patogena propisati PCR analizu. Ona određuje razinu virusnog opterećenja i šanse da se pacijent oporavi. Lančana reakcija polimeraze provodi se nakon kraja latentnog razdoblja. U istraživačkom procesu određuje se ne samo HBsAg, nego i HBeAg marker.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis omogućuje vam da odredite stupanj aktivnosti patološkog procesa i učinkovitost kompleksne terapije.

Liječnik određuje koliko je tijelo pacijenta osjetljivo na antivirusne lijekove i mogu li se poduzeti mjere za uklanjanje uzroka kronične bolesti jetre. U ovom slučaju indeks transaminaze se povećava, a indeks aktivnosti uzročnika je nekoliko puta veći od normalnog indeksa, a koncentracija aminokiselina je više od 106 kopija DNA po ml.

Norma transaminaza u krvi odgovara vrijednostima enzima AsAT i AlAT. Alanin aminotransferaza u žena ne prelazi 32 U / l, a kod muškaraca 40 U / l. Koncentracija virusa za inficirane u ranoj dobi iznosi 100.000 primjeraka po ml.

U neaktivnoj fazi virusa iu slučaju Anti-HBc, HBV DNA je u rasponu od 2000 IU / ml, a broj kopija ne prelazi 10.000.

Metoda molekularne hibridizacije

ELISA odgovor na hepatitis određuje vrstu antigena s antitijelima i enzimima. Postupno istraživanje je prihvatljivo, ali samo stručnjak koji je na vrijeme dobio rezultate analize može napraviti ispravnu dijagnozu.

Markeri virusnog hepatitisa tijekom imunoeseja su HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Na početku bolesti, oni su povišeni: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg je 1,239, virusna DNA nije otkrivena. Nakon tretmana, rezultat analize pokazuje smanjenje HBsAg na 1,07, a HBeAg postaje negativan. Prisutna je DNA virusa.

Ako se dobiju negativne vrijednosti IgM, IgG, IgA, potrebno je utvrditi je li bolest odsutna ili je došlo do potpunog oporavka.

Pozitivna vrijednost IgG ukazuje na potpuno formiran imunitet. U ovom slučaju, IgM nije otkriven. Važno je znati da studija o hepatitisu pokazuje visok IgM titar.

U akutnom razdoblju bolesti pojavljuju se negativne vrijednosti IgG. Remisija virusne bolesti popraćena je negativnim imunoglobulinom IgM. ELISA je relativno jednostavna i sigurna za zdravlje pacijenta.

Biokemijski test krvi

Proučavanje seruma identificira patologiju u tijelu, određuje dijagnozu, omogućuje procjenu rada jetre i dobivanje informacija o metabolizmu. Biokemijska analiza provodi se ujutro. Za istraživanje korištenjem materijala dobivenog iz venske krvi.

Važno je slijediti pravila pripreme za testiranje na hepatitis C - u ovom slučaju dekodiranje svih pokazatelja neće biti iskrivljeno. Ukupni bilirubin je normalno 8,5–20,2 mmol / l, a njegovo povećanje ukazuje na pojavu bolesti jetre. Vrijednosti AlAT i AsAT također se povećavaju u slučaju hepatitisa B.

Albumin kod zdravog pacijenta je 35–55 g / l. Niska razina proteina u plazmi ukazuje na virusnu upalu jetre.

Normalni LDH indeks je u rasponu od 125-250 U / l, a njegov rast znači deformaciju i uništavanje stanica oboljelog organa. Indikator LDH (sorbitol dehidrogenaze) ukazuje na stanje jetrenog tkiva. Normalna vrijednost je 0-1 U / l. Brzina rasta je karakteristična komponenta akutnog tijeka hepatitisa B ili njegov prijelaz u kroničnu fazu.

Protein GGG ima nisku aktivnost u krvnoj plazmi.

Njegov rast je uočen kod upale jetre i dugo traje. Norma - 25–49 U / l za muškarce, za žene pokazatelj je znatno niži - 15–32 U / l.

Dekodiranje znakova kroničnog hepatitisa B

Identifikacija biljega bolesti jetre glavni je zadatak liječnika koji nastoji spriječiti pogreške u dijagnozi. Važno je znati da sljedeći fiziološki čimbenici utječu na rezultat analize:

Tablica antigena i njihovo dekodiranje omogućit će pacijentu da dobije predodžbu o prirodi bolesti.

Vrste PCR-a za hepatitis B i interpretaciju rezultata

Lančana reakcija polimeraze je vrsta krvnog testa koja može točno detektirati virus hepatitisa B. Značajka metode je u tome što je u stanju pokazati HBV u svojim ranim fazama - mjesec dana nakon infekcije, dok se specifični antigen detektira kod pacijenta tek nakon 2 mjeseca, PCR može detektirati ne samo normalan DNA virus, već i mutantne sojeve koje nijedna druga analiza ne može vidjeti.

Kod dekodiranja PCR-a za hepatitis B, rezultati se uspoređuju sa standardnim vrijednostima. Na temelju toga donose se zaključci o prisutnosti bolesti (pozitivan rezultat), koncentraciji virusa (aktivnost) ili odsutnosti bolesti (negativan rezultat). Obrada podataka je 2 tjedna.

Vrste PCR-a za virusni hepatitis B

Postoje dvije vrste dijagnostike koje se propisuju za hepatitis B. Visokokvalitetna PCR omogućuje, s točnošću od 100%, reći da li je HBV u krvi ili ne. Kvantitativna PCR pokazuje aktivnost virusa, tj. Koliko je HBV DNA sadržana u 1 ml krvi.

Visokokvalitetni PCR i njegova interpretacija

Test krvi za hepatitis B pomoću PCR-a može samo otkriti prisutnost fragmenata DNA. Imenovan u slučaju kada pacijent sumnja na HBV infekciju (HBV) ili kada druge metode dijagnoze, na primjer, serološki testovi ne daju jasan odgovor. Dekodiranje rezultata kod provedbe kvalitativne analize vrlo je jednostavno:

• negativan rezultat - nema virusa;
• pozitivan rezultat - otkriven virus.

Svrha PCR-a visoke kvalitete je potvrditi ili odbiti prisutnost virusa hepatitisa B, kao i provoditi ranu dijagnozu. Ako se HBV otkrije unutar 1-2 tjedna nakon infekcije, liječenje će biti što učinkovitije. Aktivnim razvojem HBV-a tijekom 2 mjeseca i više, bolest postaje kronična i ne može se u potpunosti izliječiti.

U slučaju kada je visokokvalitetna PCR za hepatitis indicirana prisutnošću virusa, sljedeći korak je provođenje kvantitativne dijagnoze.

Kvantitativna PCR

U svrhu djelotvornog liječenja ili evaluacije rezultata terapije jednostavno nije dovoljno znati da pacijent ima HBV. Potrebno je kvantificirati vrijednost DNA virusa hepatitisa B u 1 ml krvi, to jest, virusno opterećenje na tijelo. Ovaj tip PCR-a za hepatitis B provodi se u sljedećim slučajevima:

1. Prije propisivanja liječenja.
2. Za procjenu učinkovitosti terapije.
3. Odrediti razvoj otpornosti virusa na uzete lijekove.
4. Odrediti fazu u kojoj se bolest nalazi.

Jedinica mjerenja za virus je internacionalna jedinica (IU / ml) ili broj kopija DNA / ml, tj. Broj DNA fragmenata po 1 ml krvi. Omjer između ove dvije jedinice ovisi o odabranom testnom sustavu i kreće se od 2 do 7 kopija / ml u 1 IU / ml. Ako je sustav nepoznat, tada se za konverziju koristi prosječna vrijednost:

1 IU / ml = 5 kopija / ml

Ako se kvantitativna analiza izvrši odmah, granična stopa za dijagnosticiranje bolesti je 75 IU / ml. Kada je rezultat iznad ovog pokazatelja, postavlja se dijagnoza HBV, ispod - HBV se ne otkriva.

Tretiranje kvantitativne PCR

Kod hepatitisa B slijedeće vrijednosti viremije (kopija / ml) su PCR standardi:

• 10 ^ 5 kopija / ml. Kada se, s velikom virusnom aktivnošću, češće 2 puta u šest mjeseci povećava razina ALT, odmah se propisuje antivirusna terapija.

Kako bi se utvrdilo kako će se ponašati DNK hepatitis u smislu kroničnosti, odnosno prijelaza u kronični oblik iz akutnog, koriste se i rezultati PCR dijagnostike:

• HBV DNA od 2 x 10 ^ 6 kopija / ml znači da je stjecanje kroničnog oblika bolesti neizbježno.

Priprema za istraživanje

Da bi se odredila prisutnost HBV PCR-om, krv se uzima iz vene. Postupak se uvijek provodi strogo na prazan želudac i najbolje je doći u laboratorij ujutro kada je prirodno vrijeme odmora od hrane 8 sati. Da bi rezultati ispitivanja bili točni, potrebno je unaprijed znati kako se pripremiti za pravilan odlazak u kliniku. Dodatni koraci su sljedeći:

1. Odbijanje masne hrane, pušenja, alkohola i sporta 12 sati prije zahvata.
2. Odmorite se 20 minuta neposredno prije davanja krvi.
3. Prije početka zahvata, medicinska sestra treba upozoriti na uzete lijekove.

Upozorenje! Ako se dijagnoza provodi djetetu mlađem od 5 godina, onda pola sata prije zahvata svakih 10 minuta pije 1 čašu prokuhane vode.

Ukratko

Do sada je PCR dijagnostika za otkrivanje hepatitisa B najtočnija metoda. Metoda vam omogućuje da vidite skrivene i mutirane oblike bolesti, da identifikujete bolest u prvim tjednima nakon infekcije i, prema tome, da provedete učinkovito liječenje. Ovisno o situaciji, provodi se kvalitativni ili kvantitativni PCR koji je usmjeren na otkrivanje HBV i uspostavljanje njegove aktivnosti. Da biste se testirali, morate kontaktirati virologa, specijaliste za infektivne bolesti ili hepatologa.

Suština analize PCR-a za hepatitis B i njegove rezultate

Virusni hepatitis B uspješno se liječi ako se otkrije na vrijeme, a broj antitijela i antigena u krvi pacijenta je točno određen. Uz pomoć enzimskog imunotesta za hepatitis moguće je detektirati prisutnost virusnih markera, ali oni ne mogu odrediti točnu fazu procesa.

Za kvantitativnu evaluaciju korištena je PCR dijagnostika. Pomoću testa moguće je prebrojati broj markera, predvidjeti tijek bolesti i vjerojatnost izlječenja uz pomoć antivirusnih lijekova.

Glavna prednost studije je sposobnost detektiranja i minimalnih koncentracija virusa, identifikacije patogena u stadiju vrste.

Dijagnoza hepatitisa B

Virus hepatitisa B je vrlo zarazan i otporan na vanjske utjecaje. Ona ostaje aktivna u krvi pacijenta nekoliko tjedana. Stoga je svaka osoba izložena riziku od infekcije, čak i ako se promatra profilaksa.

Za dijagnosticiranje bolesti propisuju se sljedeća ispitivanja:

Bit PCR metode

Američki kemičar K.Mullis dobio je Nobelovu nagradu, a njegova dijagnostička metoda se još uvijek koristi.

Predak metode PCR (lančana reakcija polimeraze) smatra se znanstvenikom iz Norveške H. Kleppe. Najprije je počeo provoditi pojačavanje (oporavak) DNA pomoću kratkog lanca DNA, tj. Sintetičkog prajmera (vrsta kopije).

Međutim, znanstvenik nije uspio ostvariti svoju ideju. Slične studije izradio je i američki kemičar K.Mullis, koji je 1993. dobio svoj Nobelovu nagradu za svoj izum. Od tada se PCR koristi za utvrđivanje očinstva, dijagnosticiranje genetskih bolesti i otkrivanje virusa.

Suština reakcije je da se uz pomoć enzima kopira određeni dio DNA. Možete kopirati samo područje koje odgovara navedenim parametrima i ako je u prikazanom uzorku. Za početak reakcije koriste se sljedeće komponente:

1. Matrica DNA s mjestom koje treba kopirati.
2. Prajmeri su slični strukturi DNA.
3. Polimeraza, tj. Enzim koji aktivira reakciju. Trebala bi biti termostabilna, to jest, izdržati ekstreme temperature.
4. Otopina s određenim parametrima, osiguravajući prolaz reakcije.

Reakcija se provodi u nekoliko faza:

Za otkrivanje hepatitisa B koriste se dvije vrste reakcija: kvantitativna i kvalitativna.

Kvantitativna PCR

Kvantitativna metoda određuje količinu HBV genoma

Kvantitativna PCR uključuje istodobno stvaranje kopija DNA fragmenata i određivanje broja molekula. Mjerenje se provodi nakon svake faze, tj. U stvarnom vremenu. To se postiže uporabom fluorescentnih sondi, koje su uključene u lanac molekula i svijetle u određenom razdoblju istraživanja.

Ova metoda se koristi za otkrivanje fragmenata DNA koji su markeri virusa hepatitisa. Kvantitativnom metodom moguće je točno izolirati virusni genotip. Drugim riječima, izračunat je broj kopija HBV genoma po broju bolesničke stanice.

Kvantitativna analiza daje odgovore na sljedeća pitanja:

1. S kojim intenzitetom bolest napreduje.
2. Koliko je tretman učinkovit.
3. Je li se razvila otpornost na lijekove?

Također, kvantitativno mjerenje je potrebno za dijagnozu kroničnog stadija infekcije. Ako je količina DNA ispod 100 kom / ml na normalnoj razini transaminaze, tada je osoba nositelj virusa.

U akutnoj fazi količina antitijela je mnogo veća, a antivirusnom terapijom povećanje broja antitijela ukazuje na razvoj rezistencije na lijekove, što je signal za prilagodbu liječenja.

PCR visoke kvalitete

Visokokvalitetni PCR daje manje informacija, ali može eliminirati infekciju.

Visokokvalitetni PCR može samo utvrditi prisutnost patogena u krvi. Ako ih nema, pacijent nije zaražen, a ako patogen uđe u krv, rezultat će biti pozitivan.

Međutim, uz pomoć kvalitativne reakcije nemoguće je razjasniti genom virusa, fazu bolesti. Stoga je za dijagnozu HBV-a provedeno kvantitativno i kvalitativno mjerenje.

Priprema za istraživanje

Za PCR analizu potrebna je venska krv. To se mora učiniti ujutro na prazan želudac.

Pacijent se treba pravilno pripremiti za studiju:

1. Za 10 sati odbijanja hrane, možete piti samo čistu vodu.
2. Uoči prestanka uzimanja alkohola, 4 sata ne pušiti.
3. Prije pregleda treba izbjegavati fizički i emocionalni stres.
4. Prestanite koristiti lijekove 2 dana, ako to nije moguće, potrebno je obavijestiti laboratorijskog tehničara. Neki lijekovi utječu na konačni rezultat.

Tumačenje podataka

U kvantitativnoj reakciji dobiveni pokazatelji procjenjuju se ovisno o broju kopija DNA.

Lako je interpretirati podatke o mjerenju kvalitete. On daje ili pozitivan ili negativan odgovor.

U kvantitativnoj reakciji dobiveni pokazatelji mogu se procijeniti ovisno o broju kopija DNA. Jedinica mjere je kopija / ml.

Podaci su dekodirani na sljedeći način:

1. Ako je količina HBV DNA manja od 90, infekcija je odsutna. Pacijent je razvio imunitet nakon cijepljenja ili je izliječen od bolesti.
2. Kada broj primjeraka 2x100 govori o nosiocu virusa.
3. Broj 2x106 ukazuje na kronični stadij bolesti.
4. Kod DNA više od 2x109, pacijent ima akutni stadij hepatitisa.

Pogrešni rezultati

Prednosti dijagnostičke metode pomoću polimeraznih reakcija su sljedeće:

1. Izravno otkrivanje patogena. Nasuprot tome, ELISA daje informacije o prisutnosti antitijela na virus.
2. Specifičnost. To jest, DNA regija je prisutna u uzorku biomaterijala koji se kopira.
3. Preosjetljivost. Metoda može čak otkriti fragmente pojedinačnih stanica.
4. Dijagnoza bolesti u akutnoj i latentnoj fazi. Naime, moguće je dijagnosticirati bolest u fazi pretkliničkih manifestacija.

Metoda ima nedostatke koji dovode do pogrešnih rezultata. Najznačajniji nedostatak je vjerojatnost kontaminacije materijala. Glavni izvor kontaminacije su slabo obrađene epruvete, laboratorijske ruke, reagensi.

Dio DNA iz prethodne reakcije može ući u krv. Zbog toga laboratoriji imaju povećane sanitarne zahtjeve: zasebne prostorije, plastične cijevi, ultraljubičasto liječenje laboratorija itd.

Lažno negativni rezultati mogu biti posljedica smanjene osjetljivosti reakcije. To se događa u sljedećim situacijama:

• pacijent uzima lijekove, na primjer, antikoagulanse;
• osoba je pretrpjela fizički stres prije analize (igranje sporta, naporan rad);
• nedavno se pojavila infekcija.

Ako pacijent ima visoku vjerojatnost infekcije, a rezultat istraživanja je negativan, treba ga ponovno ispitati.

Pogledajte i:

zaključak

Metoda lančane reakcije polimeraze je glavna i najinformativnija za dijagnozu HBV. To omogućuje ne samo da se utvrdi status nositelja infekcije, već i da se razjasni stadij bolesti, da se ocijene rezultati liječenja.

Za točniju dijagnozu koristi se kvalitativno i kvantitativno mjerenje. Nedostaci metode uključuju vjerojatnost kontaminacije, smanjenu osjetljivost i prilično visoku cijenu.

Da bi rezultati bili najpouzdaniji, treba se pravilno pripremiti za proučavanje i provesti ga u klinici s odgovarajućom licencom i dobrom reputacijom.

Hepatitis B DNA i PCR

DNA testovi i PCR virusa hepatitisa B su najosjetljiviji testovi koji detektiraju tragove molekularne DNA u jetri koji identificiraju prisutnost virusa. Suština metode je višestruko kopiranje fragmenta DNA koji pripada uzročniku bolesti.

PCR tipa hepatitisa B je lančana reakcija polimeraze vanjskog kemijskog reagensa s biološkim materijalom koji se istražuje, s ciljem identificiranja virusnih molekula DNA u krvi i njihovih kvantitativnih pokazatelja po jedinici volumena. Analiza je dodijeljena u sljedećim slučajevima:

• ako kod bolesnika imate znakove hepatitisa B;
• tijekom dijagnostičkih aktivnosti za mješoviti hepatitis;
• pojasniti učinkovitost terapije.

Za PCR analizu prikuplja se venska krv. Prije studije trebate se suzdržati od jedenja oko 8 sati.

Smatra se da je normalan rezultat u otkrivanju DNA u virusu "neotkriven". To znači da je virus odsutan u krvi ili je njegov sadržaj beznačajan. Konačnu dijagnozu može napraviti samo specijalist na temelju opsežne biokemijske i imunološke analize krvne plazme za hepatitis tipa B. Liječnik propisuje tijek terapije. Samoliječenje uključuje previše rizika.

Uzorkovanje venske krvi vrši se za PCR analizu.

Metoda PCR omogućuje otkrivanje DNA patogena čak i uz minimalnu prisutnost u odabranom uzorku krvi. Osim toga, analiza omogućuje otkrivanje antigena koji su već razvijeni za virus. Svaki od antigena ukazuje na specifičan stadij bolesti:

• HBsAg - virus je trenutno prisutan.
• Anti-HBcor - patogen trenutno je odsutan, ali je bilo u prošlosti.
• Anti-HBs - u krvi postoje antitijela na hepatitis B (kao opcija - herpes, HIV, klamidija, mikoplazmoza, kandidijaza, tuberkuloza, krpeljni encefalitis i mnoge druge bolesti).

Patologija i njezini znakovi

Hepatitis B ili HBV je virusna infekcija koja pogađa stanice jetre. Opasno je ne samo izravnim djelovanjem na parenhim organa, što slabi barijernu funkciju i opći imunitet. Moguće su ozbiljnije posljedice, kao što su ciroza jetre i pojava malignih neoplazmi.

HBV se prenosi krvlju osobe zaražene hepatitisom, njegovim izmetom, preko kontakta s sluznicama, osobito tijekom spolnog odnosa, kožnih lezija, kroz nesterilne špriceve tijekom transfuzije krvi ili tijekom operacija abdomena. Novorođenče može biti zaraženo bolesnom majkom kada dodiruje pukotine u bradavicama.

Sljedeći simptomi su karakteristični za hepatitis B:

Neobična umor

• povećanje umora pri malim opterećenjima;
• neobičan umor;
• težina u desnom hipohondriju;
• smanjen apetit, mučnina;
• žućkastoća kože, bjeloočnica;
• svijetli izmet;
• tamna mokraća;
• bol u zglobovima.

Razdoblje inkubacije, nakon kojeg se počinju pojavljivati ​​ti simptomi, iznosi od jednog do šest mjeseci. To je razdoblje nakupljanja virusnih stanica u krvnom toku jetre. Kada njihova koncentracija dosegne kritičnu masu, virus se probije kroz membrane hepatocita i nastavlja se razmnožavati unutar stanica. Kao rezultat toga, stanice jetre umiru, razvija se ciroza koja, u nedostatku odgovarajućih terapijskih mjera, uzrokuje smrt pacijenta. Pravovremen krvni test za PCR i DNK hepatitisa B pomaže izbjegavanju negativnih.

Indikacije za PCR su:

• pozitivan DNK test koji potvrđuje dijagnozu hepatitisa B;
• akutni i kronični hepatitis;
• mješoviti hepatitis;
• kvantitativno određivanje virusa u krvnom serumu;
• razvoj taktike učinkovite terapije.

Priprema za analizu

Priprema za dijagnozu pomoću PCR-a određena je tipom biomaterijala. Tako krv i urin doniraju samo ujutro, na prazan želudac. Također se uzimaju mrlje i ogrebotine iz urogenitalnog područja. Jedino ograničenje za žene je menstruacija. Seks je ograničen za oba spola uoči istraživanja.

Rezultati PCR-a mogu se smatrati pouzdanim samo ako je pacijent pravilno pripremljen za postupak. Ova studija podrazumijeva sljedeće uvjete:

• pun duhovne udobnosti, odsutnost bilo kakvog uzbuđenja. Da bi se ova analiza mogla provesti i kod kuće. Potrebno je samo pozvati liječnika s odgovarajućom opremom;
• uzdržavanje od hrane, alkohola, pušenja, tjelesne aktivnosti najmanje 8-12 sati prije analize, u suprotnom će podaci istraživanja biti iskrivljeni;
• 15-20 minuta potpunog opuštanja prije uzimanja krvi;
• prekid liječenja (ako to nije moguće, potrebno je upozoriti laboratorij);
• djeci mlađoj od pet godina na pola sata prije analize treba piti prokuhanu vodu u malim porcijama.

Kako je studija

PCR analiza temelji se na načelima molekularne biologije. Oni se sastoje u upotrebi posebnih enzima koji cijepaju i repliciraju dijelove DNA i RNA infektivnog agensa koji se nalazi u krvi. Nakon ove operacije, dobiveni uzorci su identificirani bazom podataka koja je dostupna u laboratoriju. Istovremeno se detektira vrsta infekcije i koncentracija patogena u krvi.

Za studiju se koristi amplifikator - termostat sposoban za grijanje i hlađenje cijevi s biomaterijalom. To je potrebno za aktiviranje procesa replikacije. Točnost analize ovisi o točnosti temperaturnih parametara.

Rezultati dekodiranja

Pozitivan rezultat za pacijenta je zaključak laboratorija "nije otkriven". To znači odsustvo DNK hepatitisa B u krvi, au numeričkom smislu to je oko 120 IU / ml, ili 200 kopija po istoj jedinici volumena krvi. Ova vrijednost je norma. Za biološki materijal potrebno je da ne bude kontaminiran.

Dekodiranje drugih rezultata analize omogućuje izradu sljedećih dijagnoza:

• Koncentracija DNA hepatitisa B u krvi je veća od 200 kopija, ali ispod kritične razine. Teška patologija je odsutna.
• Viremija u blagom obliku, do 500 primjeraka po ml. Izbor liječenja ovisi o pokazateljima biopsije jetre i stupnju pogoršanja njegovih funkcija.
• Povećana koncentracija virusa (više od 500 kopija / ml). Upalni proces u aktivnoj fazi zahtijeva intenzivnu antivirusnu terapiju.
• Maksimalna količina virusa (preko 800 primjeraka po ml). Terapijske mjere razvijaju se na temelju stanja pacijenta i usmjerene su na maksimalno moguće poboljšanje.

Za pacijenta dobar rezultat je zaključak "nije otkriven"

Utvrđivanje kvantitativnih pokazatelja sadržaja DNA u hepatitisu B tijekom PCR-a osnova je za izbor terapijskog tijeka. Nakon tri ili šest mjeseci ponovno se provode testovi kako bi se testirala učinkovitost antivirusne terapije.

Značajka lančane reakcije polimeraze

U metodi PCR-a koriste se dva pristupa određivanju DNK koji pripadaju virusu: kvalitativni i kvantitativni.

Kvalitativni pristup potvrđuje ili negira prisutnost hepatitisa B. PCR se propisuje na zahtjev pacijenta koji sumnja da je zaražen HBV infekcijom ili u slučaju kada rana dijagnoza ne daje nedvosmislene rezultate na neki drugi način.

Ako se virus hepatitisa B može otkriti najkasnije dva tjedna nakon ulaska u tijelo, pozitivna prognoza za liječenje je najvjerojatnije. U budućnosti će bolest početi napredovati. Nakon otprilike dva mjeseca ući će u kroničnu fazu. Potpuno izlječenje u ovom slučaju postat će nemoguće.

Kvantitativni pristup PCR-u koristi se samo kada se otkrije virus. On procjenjuje:

• specifično virusno opterećenje jetre;
• intenzitet progresije bolesti;
• otpornost na antivirusne lijekove;
• učinkovitosti liječenja.

Ti su pokazatelji od izravne praktične važnosti. Osobito kvantitativni pokazatelj DNA. Prognoza u akutnoj fazi hepatitisa B ovisi o koncentraciji virusa u krvotoku jetre, tako da niska koncentracija virusnih stanica gotovo potpuno isključuje prijelaz akutnog u kronični hepatitis. Takvi pacijenti ne predstavljaju opasnost za druge. Visoko virusno opterećenje pridonosi kroničnosti patološkog procesa i mogućnosti infekcije hepatitisa kod osoba koje su u kontaktu s pacijentom.

Tu je i veza između koncentracije virusnih gena u krvi i cirotične degeneracije jetre i pojave raka njegovog parenhima.

PCR testovi pomažu liječniku da otkrije nosioce virusa.

Učinkovitost antivirusne terapije određena je stupnjem smanjenja koncentracije hepatitis B DNA u cirkulaciji jetre. Dovoljan rezultat je smanjenje virusnog opterećenja 1-2 puta uz intenzivno liječenje od tri mjeseca do šest mjeseci. Niže stope zahtijevaju promjenu u liječenju.

Iz toga slijedi prognoza razvoja patologije i imenovanje odgovarajuće terapije

• kvantitativni volumen DNA DNA virusa u krvnom serumu;
• srodni biokemijski parametri (na primjer, razina leukocita u krvi i sadržaju bilirubina);
• markeri virusne infekcije;
• rezultati biopsije jetre.

PCR opće namjene

Analize uz pomoć lančane reakcije polimeraze pomažu liječniku:

• detektiraju nositelje virusa;
• predvidjeti razvoj hepatitisa tipa B;
• pobrinite se da bolest postane kronična;
• prati aktivnost virusa u svim fazama razvoja;
• identificirati mutirane i skrivene sojeve hepatitisa B;
• procijeniti učinkovitost liječenja virusa pri odabiru određene taktike i promijeniti je u slučaju nedovoljnog uspjeha.

Prednosti metode

Za razliku od drugih testova koji se koriste za dijagnosticiranje hepatitisa B, PCR ima:

PCR analiza je izuzetno osjetljiva.

1. Izuzetna osjetljivost. Tehnika omogućuje istraživaču da otkrije uzročnika bolesti, čak i ako je koncentracija njegovih molekula DNA u krvi minimalna. To vam omogućuje da poduzmete preventivne i kurativne mjere u ranom stadiju bolesti, kada očito još nije izražena nikakvim simptomima.
2. Široka pokrivenost mogućnosti. PCR može otkriti ne samo uzročnika virusnog hepatitisa B, nego i brojne druge patologije.
3. Univerzalnost pristupa. Biomaterijal za istraživanje može biti krv, slina, sluznice i koža.
4. Učinkovitost. Zaključak će biti gotov točno jedan dan nakon uzimanja uzorka krvi (rezultat analize je dobiven najkasnije 7 sati).
5. Pouzdanost. Pod svim uvjetima PCR metode, nikada ne pokazuju lažne podatke.
6. Studija pristupačnosti cijena. Po trošku, PCR je samo malo viši od uobičajenih testova koji koriste krv kao biomaterijal.

Jedini trošak istraživanja je njegova tehnološka složenost. Za kvalitetnu provedbu PCR-a potrebna je izuzetno čista biomaterijala, suvremena oprema i dobro obučeno osoblje. Poželjno je prijaviti se za dijagnostiku korištenjem ove metode u specijaliziranim laboratorijima.

Virusni hepatitis B odnosi se na bolesti, čije je potpuno izlječenje moguće samo u najranijim fazama razvoja. Identificirati bolest u ovoj fazi pomaže u dijagnosticiranju preosjetljivosti PCR-om. Prvi simptomi koji izazivaju sumnju na oštećenje jetre od strane virusa trebali bi biti razlog za konzultaciju sa specijalistom. Ako se dijagnoza potvrdi, liječenje treba započeti odmah. To će poboljšati prognozu i povećati vjerojatnost podržavanja jetre u zdravom stanju dugi niz godina.