Kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C

Hepatitis je ozbiljna bolest koja ima mnogo uzroka. Temelj njegovog razvoja je izravno ili neizravno oštećenje jetre. S obzirom na njegovu važnost za cijeli organizam, može se samo pretpostaviti koliko je patologija teška. U ovom članku detaljnije ćemo ispitati značajke tečaja i laboratorijske dijagnoze hepatitisa C. t

Uzrok bolesti je virusni agens koji se odnosi na patogene koji sadrže RNA. Ima osobitost - sposobnost mutiranja, odnosno mijenjanja strukture. Zbog toga, infekcija izmiče napadu imunološkog sustava iu većini slučajeva dovodi do kronične upale jetre.

S obzirom na postojanje različitih podtipova virusa, izbor lijekova treba se temeljiti na rezultatima genotipizacije. Unatoč dugom istraživanju bolesti i značajkama strukture HCV-a, još nije bilo moguće razviti specifično cjepivo za bolest.

Poteškoće rane dijagnoze leže u asimptomatskom tijeku hepatitisa, zbog čega osoba dolazi u posjet liječniku u fazi ciroze. Da bi se bolest otkrila na vrijeme, potrebni su redoviti liječnički pregledi. Samo laboratorijskim testiranjem krvi moguće je otkriti HCV i spriječiti infekciju onih oko vas. Činjenica je da nositelj infekcije dugo vremena ne može pogoditi patologiju i nastaviti prenositi virus zdravim ljudima.

Načini prijenosa

U većini slučajeva virus se širi krvlju, jer sadrži najveću koncentraciju patogenih uzročnika. Dakle, infekcija se prenosi:

  • s hemodijalizom;
  • s inficiranom iglom;
  • u procesu borbe, kada je koža ozlijeđena i dolazi do kontakta s krvlju;
  • transfuzijom krvi (transfuzija krvi).

Vjerojatnost infekcije tijekom intimnosti je beznačajna, budući da je u spermi i vaginalnom iscjetku mali broj patogena. Rizik od infekcije značajno se povećava kršenjem integriteta sluznice genitalija. To se događa kod agresivnog i analnog seksa.

Što se tiče vertikalnog načina prijenosa, on se provodi u procesu rada. U razdoblju gestacije ploda patogen ne može prodrijeti kroz placentu do embrija. U prirodnom porođaju, patogeni agens prenosi se djetetu traumatizacijom njegove kože, kada se promatra kontakt s majčinom krvlju.

Nakon prodiranja patogena u zdrav organizam, počinje sinteza antitijela, koja su zaštita od infekcije i pripadaju imunološkim strukturama. Oni se nalaze u početnoj studiji osobe koja koristi ELISA.

Da bi se potvrdila dijagnoza, pacijent je podvrgnut lančanoj reakciji polimeraze. To je analiza genetskog materijala patogenog agensa i određivanje virusnog opterećenja.

Laboratorijska dijagnostika hepatitisa C

Laboratorijska dijagnoza počinje imunoanalizom enzima. Njegov je glavni zadatak otkriti protutijela proizvedena protiv patogena. Njegova učinkovitost je gotovo 95%. Zahvaljujući ovom istraživanju, moguće je identificirati nosača virusa u predkliničkoj fazi i poslati ga na daljnje ispitivanje.

Kvalitativna analiza ELISA-e ukazuje na prisutnost ili odsutnost imunoglobulina u krvi pacijenta. Njegov rezultat može biti "pozitivan" ili "negativan". Po primitku prvog odgovora, osoba se šalje na sljedeći pregled - PCR. Njegova cijena ovisi o kvaliteti reagensa i laboratorija. Cijena lančane reakcije polimeraze može doseći 4 tisuće rubalja.

PCR svojstva

Koristeći lančanu reakciju polimeraze, čak i mala količina biološkog materijala omogućuje procjenu količine virusa u krvi, tj. Za izračunavanje koncentracije patogena u jednom mililitru tekućine.

S pojavom PCR-a dijagnoza hepatitisa postala je mnogo lakša. Analiza omogućuje identifikaciju HCV RNA, utvrđivanje stupnja infektivnog procesa i infektivnosti nosača virusa.

Postoji nekoliko vrsta genetske dijagnoze:

  1. Kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C - potvrđuje prisutnost ili odsutnost HCV-a u krvi subjekta:
  2. kvantitativno, kroz koje možete izračunati koncentraciju virusa i utvrditi stadij bolesti. Rezultat se daje u IU / ml ili kopijama / ml (ovisno o laboratoriju);
  3. genotipizacija - potrebna za određivanje genotipa HCV. To je potrebno za točan odabir lijekova koji će u ovom slučaju biti najučinkovitiji. Analiza indirektno ukazuje na ozbiljnost patološkog procesa u jetri. Tako se kod trećeg genotipa patogena najčešće primjećuje steatoza, čija je osnova akumulacija masti u hepatocitima (njegovim stanicama). Osim toga, tip virusa utječe na ishod i trajanje terapijskog tijeka.

Kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C

Najprije se u laboratoriju ispituje biološki materijal na prisutnost HCV RNA. Važno je zapamtiti da kvalitativna analiza hepatitisa C ima određenu razinu osjetljivosti, te stoga ne mora uvijek dati pravi odgovor. U tom slučaju, preporuča se ponovna laboratorijska dijagnostika uporabom drugih reagensa.

Da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je koristiti testne sustave osjetljivosti od najmanje 50 IU / ml.

Dijagnostički rezultat može biti "pozitivan" ili "negativan". Ako se patogen ne pronađe u krvi, studija je završena. Ako se patogeni agens detektira u uzorku, tada se kvantificira virusno opterećenje.

Lažno negativan odgovor dobiva se kada se proces krši, na primjer, aktivne komponente koje potiskuju konstrukciju kopija patogena ulaze u medij. Stoga nije moguće prikazati pravu krvnu sliku, zbog čega se ne dijagnosticira infekcija osobe.

Lažno pozitivan rezultat može se dobiti ako je epruveta za prikupljanje biološkog materijala, kao i okolina za istraživanje, kontaminirana. Osim toga, takav odgovor analize moguć je kada se miješaju infekcije, kada na jetru utječe nekoliko virusa, na primjer, hepatitis C i D.

Indikacije za kvalitativno istraživanje

Liječnik može propisati pacijentu kvalitativnu studiju o identifikaciji RNA virusa hepatitisa C:

  • nakon primitka pozitivnog ili sumnjivog odgovora na enzimski imunološki test;
  • za provjeru dijagnoze;
  • odrediti količinu virusa;
  • postavljanje stupnja bolesti;
  • dijagnoza miješane infekcije. Hepatitis C često inficira jetru istovremeno s virusom "D";
  • određivanje terapijske taktike uzimajući u obzir genotip uzročnika;
  • procjenu dinamike promjena tijekom liječenja antivirusnim lijekovima.

Prednosti lančane reakcije polimeraze uključuju:

  1. visoka osjetljivost tehnike koja omogućuje utvrđivanje činjenice infekcije u predkliničkoj fazi;
  2. identifikacija genetskog materijala patogena, a ne njegova protutijela;
  3. mogućnost uspostavljanja podtipa patogenog agensa;
  4. visoka dijagnostička brzina, budući da nije potrebno zasijavanje materijala na hranjivom mediju, a dovoljno je koristiti specifične testne sustave. Osoba dobiva rezultat nakon 5 sati;
  5. svestranost. Analiza omogućuje identifikaciju bilo kojeg genetskog materijala (RNA, DNA). Zahvaljujući tome, liječnik može potvrditi hepatitis C i druge vrste bolesti (B);
  6. sposobnost otkrivanja latentne infekcije.

Kvantitativno istraživanje

U istraživanju krvi pomoću lančane reakcije polimeraze može se izračunati broj patogena u fiksnom volumenu biološkog materijala. Pokazatelj je prikazan u IU / ml. Kroz analizu je moguće odrediti stupanj zaraze bolesnika, odrediti fazu infektivnog procesa, te ocijeniti učinkovitost terapije lijekovima.

Na temelju PCR-a, stručnjak odlučuje koje doze lijekova mogu blokirati reprodukciju patogena. Osim toga, određuje se trajanje antivirusnog liječenja i prognoza života. Važno je zapamtiti da testni sustavi imaju visoku osjetljivost, stoga metoda omogućuje potvrđivanje infekcije osobe u predkliničkoj fazi.

genotipizacija

S obzirom na sposobnost patogena da mutira, njegov genotip potreban je za određivanje taktike liječenja i izbora antivirusnih lijekova. Primjerice, liječenje HCV 1 traje 48 tjedana, s pozitivnim trendom koji se primjećuje samo u 60% slučajeva. Genotipovi 2 i 3 imaju povoljniju prognozu. Antivirusni lijekovi propisuju se 8 mjeseci, a njihova učinkovitost doseže 85%.

Prema statistikama, u većini slučajeva, HCV 1, 2 i 3 registrirani su u Ruskoj Federaciji.

Kod dešifriranja laboratorijskog testa, ovaj odgovor se može naznačiti - "nije upisano". To znači da virus cirkulira u cirkulacijskom sustavu pacijenta i ne može ga prepoznati sustav testiranja. Rezultat analize u ovom slučaju pokazuje da patogen nije tipičan za određeno geografsko područje.

Kako dobiti pouzdane rezultate?

Da bi kvalitativna studija PCR-a za otkrivanje RNA uzročnika hepatitisa C pokazala točne rezultate, potrebno je pridržavati se zahtjeva za pripremu za laboratorijsku dijagnostiku:

  1. uzorkovanje krvi provodi se na prazan želudac, a "gladni" jaz ne smije biti kraći od 8 sati;
  2. dva dana prije studije preporuča se prestati piti alkoholna pića i napustiti začinjena, masna i dimljena jela;
  3. poništiti uvođenje lijekova koji smanjuju zgrušavanje krvi, na primjer, heparin. Ako su ti lijekovi propisani iz zdravstvenih razloga, morate o tome obavijestiti liječnika. Osim toga, specijalist bi trebao biti svjestan prijema drugih lijekova koji mogu utjecati na rezultate laboratorijskih istraživanja;
  4. Uoči prikupljanja biološkog materijala ne bi trebalo provoditi fizioterapeutske postupke i treba ih podvrgnuti teškim fizičkim naporima.

Na rezultate analize može utjecati ne samo osoba koja daruje krv, već i drugi čimbenici, a to su:

  • uzorkovanje krvi loše kvalitete;
  • nepoštivanje preporuka o transportu biološkog materijala;
  • nedovoljna osposobljenost laboratorijskih radnika;
  • nepoštivanje tehnike istraživanja;
  • uvođenje antikoagulansa (heparina) uoči uzimanja uzoraka krvi. Ova skupina lijekova smanjuje zgrušavanje i time usporava rad reagensa.

U različitim laboratorijima, dijagnostički odgovor može se neznatno razlikovati, ali te pogreške ne utječu na konačni rezultat studije.

Posebna se pozornost posvećuje tipovima ispitnih sustava koji se koriste u laboratoriju. Često se prednost daje reagensima visoke osjetljivosti. To je važno za bolesnike s niskim virusnim opterećenjem, jer ga je teško otkriti.

Koliko često se provodi laboratorijski test?

Primarna lančana reakcija polimeraze provodi se kod ljudi koji su imunoesejom otkriveni protutijela na patogene hepatitisa. U tom slučaju, određuje se da potvrdi činjenicu zaraze osobe i utvrdi stadij bolesti. Osim toga, analiza omogućuje određivanje podtipa virusa, što je posebno važno za izbor lijekova.

Sljedeće razdoblje obveznih laboratorijskih ispitivanja je 3 mjeseca od početka antivirusne terapije. Dijagnostika omogućuje procjenu učinkovitosti lijekova, prilagodbu doze ili njihovu zamjenu.

Osim osnovnih testova, PCR se može dodatno provesti 4 i 24 tjedna od početka liječenja. Pozitivna prognoza bolesti potvrđena je smanjenjem virusnog opterećenja nakon tri mjeseca terapije. Na primjer, trebala bi se smanjiti s 1 milijun IU / ml na nekoliko stotina tisuća.

Ako koncentracija patogenih uzročnika u krvi ostane na istoj razini ili se blago poveća, to ukazuje na neučinkovitost antivirusnih sredstava i zahtijeva njihovu zamjenu. Primjenom PCR-a na kraju liječenja moguće je potvrditi oporavak pacijenta.

Da bi se ispravno protumačili rezultati laboratorijske dijagnostike, potrebno je savjetovanje s hepatologom ili specijalistom za zarazne bolesti. S obzirom na visoku učestalost lažnih odgovora u ELISA-i, analiza se koristi isključivo za primarni skrining. Za temeljitiji pregled bolesnika korištena je lančana reakcija polimeraze.

Pro analiza PCR-a za virus hepatitisa C

Hepatitis C je ozbiljna bolest jetre za svaku osobu. Patologiju uzrokuje flavivirus HCV, u čijoj strukturi je prisutna RNA molekula, koja nosi opći genetski kod virusa.

Patologija može biti različitih oblika, sve izravno ovisi o općem stanju osobe i karakteristikama svakog pojedinog organizma.

Ova struktura omogućuje analizu PCR-a za prisutnost virusa u tijelu u kategoriji hepatitisa C.

To vam omogućuje da na vrijeme identificirati virus koji je opasan za ljude, proći kroz liječenje droge i vratiti zdravlje, štiteći tijelo od uništenja jetre.

HCV virus se može manifestirati, kako u akutnom - opasnom obliku, tako iu kroničnom. Ako je osoba u jednom ili drugom trenutku otkrila taj virus, mora biti dodijeljena PCR analizi.

Zašto je provedena PCR analiza?

Na temelju rezultata analize, liječnik će moći sastaviti režim liječenja

Laboratorijska medicinska analiza PCR-a za hepatitis C je studija biološkog materijala uzetog za određivanje flavavirusa. Istraživanje se odnosi na lančanu reakciju polimeraze.

Prikazuje ukupnu kvantitativnu vrijednost virusne lezije, njezina kvalitativna svojstva, a moguće je i odrediti genotip virusa koji sadrži RNA.

Važno je! Na temelju ove analize liječnik određuje metodu, vrstu terapije i njezino trajanje. Također, kroz analizu, moguće je odrediti ukupni epidemiološki faktor, odnosno razinu rizika od prijenosa bolesti na druge nositelje.

Analiza u suvremenoj medicini naziva se i RNA analiza. Razlog tome je što je svojstvena hepatitisu C flavavirus sastavljen od čestice RNA čija je veličina približno 30-60 nm. Jedna od karakterističnih značajki ovog virusa je određena sklonost za mutaciju.

Svaka podvrsta ili genotip prisutna ima različite otpornosti. Ova okolnost postaje osnova za različite metode istraživanja i liječenja bolesti, kao i daljnju prognozu dobro provedene terapije.

Kako

Analiza se provodi isključivo na prazan želudac, tj. Venska se krv daje prije doručka. Metoda ispitivanja provodi se pomoću Real-Time PCR-a ili visoko osjetljivom dijagnostikom modernih standarda, koja se provodi u realnom vremenu.

Donja granica detekcije u ovom slučaju je 15 IU / ml. Analiza se provodi strogo pomoću zatvorenih automatiziranih sustava. Hepatitis C se može odrediti pomoću testova kao što je COBAS AMPLICOR s ukupnom razinom osjetljivosti od 50-100 IU / ml.

Važno je! Sve vrste sličnih suvremenih laboratorijskih istraživanja provode se na temelju uvažavanja određenog praga osjetljivosti.

Riječ je o sposobnosti reagensa koji se koristi za detektiranje minimalne razine sposobnosti reagensa da odredi virus u biološkom materijalu koji se ispituje. Ako u tijelu nema bolesti, rezultat studije će izgledati kao “nije pronađen”.

Slika prikazuje sklop PCR analize:

Vrste PCR analize i njezini rezultati

Ako imate najmanji problem i bol u području kolačića, odmah se obratite liječniku koji će provesti temeljitu studiju. PCR analiza za hepatitis C temelji se na tri glavne točke:

  1. Kvantitativna analiza.
  2. Kvalitativna analiza.
  3. Genotipizacija.

Provedeni testovi pružaju mogućnost utvrđivanja i utvrđivanja točne prirode viremije i različitih simptoma genetskog plana prisutnosti patogena. U izravnoj proporciji s osjetljivošću, od provedenog dijagnostičkog sustava, medicinska istraživanja mogu se provesti jednom, kao i neke potvrde.

To treba učiniti kako bi se razjasnili prethodno dobiveni rezultati, te se u ovom slučaju koristi osjetljivijim reagensom.

PCR visoke kvalitete

Kvalitativna analiza za PCR je drugo ime za studiju kao što je lančana reakcija polimeraze. Sa standardnom osjetljivošću testa, koja omogućuje određivanje prisutnosti virusnog mikroba, indikatori će biti u rasponu od 10-500 IU / ml.

Uz negativnu analizu bolesti, analiza će pokazati da će ukupna razina koncentracije u krvi pacijenta biti za red veličine niža od općeg praga osjetljivosti za dijagnostički sustav.

Ako je tijekom PCR-a dobiven "neotkriven" odgovor, za naknadno liječenje morat ćete znati ukupni prag osjetljivosti reagensa. Što se tiče pozitivnog odgovora, tijekom PCR analize, može se dobiti već na 4 dan nakon infekcije. Standardne frakcije proteina do utvrđenih flavavirusa mogu se pojaviti mnogo kasnije.

Opća shema PCR analiza može se prikazati na sljedeći način:

Kvantitativna PCR

Kvantitativni PCR je poseban pokazatelj proizvedenog virusnog opterećenja, koji odražava ukupnu razinu koncentracije virusne RNA u ljudskom tijelu. Ovaj pokazatelj pokazuje količinu virusnih RNA enzima koja je prisutna po kubičnom centimetru uzetoj iz krvne žile.

Rezultati ovog istraživanja u sustavu medicinskih istraživanja označeni su u jedinicama od jednog mililitra. Na potvrde izdane u rukama, ovaj pokazatelj može izgledati 1,7 milijuna ili 1.700.000 IU / ml.

Kvantitativna PCR analiza određena je tim pacijentima prije provođenja antivirusne terapije. Drugi put se održava 12. tjedan liječenja, što vam omogućuje da ispravno ocijenite rezultate terapije hepatitisom C. Drugim riječima, analiza omogućuje određivanje važnih parametara kao:

  1. Utvrđena je razina infektivnosti, odnosno stupanj rizika od prijenosa mikroorganizama iz zaražene osobe na zdravu osobu. Što je veća koncentracija RNA virusa flavavirusa, to je veća vjerojatnost infekcije druge osobe, što je važno u seksualnim odnosima.
  2. Ukupna razina učinkovitosti i odabrana metoda liječenja.
  3. To je idealna prilika za određivanje trajanja i prognoze antivirusne terapije. U pravilu, što je opterećenje veće, to će dulje trajati.

Važno je znati da kvantitativni PCR ovisi o specifičnoj vrsti laboratorijskog testa i pragu osjetljivosti. Najniža granica utvrđenog standarda je pokazatelj koji ne doseže 600.000 IU / ml.

Prosjek je u rasponu od 600,000 do 700,000 IU / ml. Ako se dobiju rezultati iznad 800.000 IU / ml, liječnik odmah određuje visoku razinu koncentracije tvari kao što je RNA s virusom prisutnim u pripravku.

Važno je! Izravna veza između razine HCV RNA i ozbiljnosti bolesti pokazuje da je taj virus prisutan u ukupnom sastavu krvi, te također bilježi složenost patologije. Pacijent može imati dovoljno visoko virusno opterećenje. Osim toga, ovaj odnos pokazuje da postoji ozbiljna šteta na stanicama.

genotipizacija

Zbog relativno visoke mutacijske aktivnosti HCV u prirodi, tijekom provedenog ispitivanja moguće je odrediti kako je tip virusa prisutan u krvi bolesne osobe. U suvremenoj medicini poznato je 11 genotipova virusa kao što je hepatitis C. To uključuje prilično velik broj različitih podvrsta ili podtipova.

Tipovi 1,2 i 3 poznati su i uobičajeni u Rusiji, a genotipizacija je vrlo važan element provedene analize. Uz to, liječnik razumije razinu otpora ili otpornosti patologije na odabrane lijekove.

Gotovo uvijek se na temelju te analize gradi buduće liječenje. To je važno jer postoje pravila liječenja kao što su:

Kvalitativna analiza za hepatitis C

8. ožujka 2017., 12:29 Stručni članci: Nova Vladislavovna Izvčikova 0 10,547

Kvalitativna analiza lančane reakcije polimeraze - PCR za hepatitis C određuje prisutnost ili odsutnost HCV u tijelu. U laboratorijskim uvjetima istražuje se struktura RNA, koja će uključivati ​​virus. U slučaju otkrivanja virusa C potrebno je proći postupak liječenja, jer će zanemareno stanje jetre rezultirati teškim posljedicama. Visokokvalitetni PCR se izvodi nakon oporavka kako bi se potvrdilo odsustvo antitijela. Imenovan i za rutinsku inspekciju. Uz nisku koncentraciju uzročnika u krvi, PCR (kvalitativni) možda neće ništa otkriti, jer dijagnostički sustav ima vlastite pragove osjetljivosti. U početnom stadiju bolesti ili blagom obliku, PCR se izvodi ultradiagnostikom na ultra-osjetljivoj opremi.

Što je RNA virus?

Pojam RNA virusa hepatitisa C (ili RNA virusa hepatitisa C) je sama bolest jetre. Virus C se veže za zdravu stanicu tijela prodirući unutra. Tijekom vremena, proširila se po cijelom tijelu, potrebno je samo ući u krv. Kao posljedica toga, patogen prodire u jetru, spaja se sa svojim stanicama i naporno radi. Jetrene stanice (hepatociti) djeluju pod njezinim utjecajem, prolaze kroz promjene i od toga umiru. Što je duže virus C u jetri, veći je broj stanica koje umiru. S vremenom se razvijaju opasne bolesti koje dovode do maligne degeneracije i smrti.

Infekcija jetre s ovom vrstom virusa ne može se manifestirati izvana. Dugi niz godina ili desetljeća, zaražena se osoba osjeća potpuno zdravom, a samo nasumično ispitivanje najčešće otkriva patologiju. Kada se daruje krv za hepatitis, ispituje se dio lanca RNA (ribonukleinske kiseline) koji je dio ljudskog gena (DNA). Rezultati laboratorijskih ispitivanja ne bi se trebali koristiti za samoliječenje, jer je to samo pokazatelj. Točnu sliku i daljnju dijagnozu bolje određuje liječnik.

Kada se završi: indikacije za istraživanje

U potvrdi HCV-a provedena je PCR analiza (lančana reakcija polimeraze). PCR studije pomažu u pronalaženju uzročnika u RNA strukturi i propisuju učinkovitu terapiju. Imenovan u sljedećim slučajevima:

  • otkrivanje znakova upale jetre;
  • probirne studije za prevenciju;
  • ispitivanje osoba u kontaktu;
  • dijagnoza hepatitisa mješovitog podrijetla (određivanje glavnog patogena);
  • određivanje stupnja reproduktivne aktivnosti virusa u kroničnom obliku;
  • ciroza jetre;
  • odrediti učinkovitost propisanog liječenja.
Istraživanje PCR propisuje liječnika da odredi učinkovitost tijeka liječenja hepatitisa.

Postoji kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a. Kvantitativni PCR pokazuje postotak RNA s nosačima virusa u krvi, a kvalitativno ukazuje na prisutnost ili odsutnost virusa. Pozitivan pokazatelj kvalitete (prisutnost hepatitis C RNA) također treba kvantitativno istraživanje. Visoka razina koncentracije uzročnika hepatitisa C povezana je s rizikom prijenosa, odnosno infekcije drugih. Niski brojevi se bolje mogu liječiti. Količina RNA virusa u krvi nije povezana s intenzitetom bolesti. PCR analiza također se provodi u slučaju terapije interferonom kako bi se propisalo trajanje i složenost tijeka liječenja.

Značajke visokokvalitetne PCR analize za hepatitis C

Kvalitativnoj analizi dodijeljen je indikator lančane reakcije polimeraze za sve pacijente koji imaju antitijela na hepatitis C u krvi, a oni koji su bili bolesni i oporavili se moraju ponovno uzeti test. Preporučuje se da se napravi analiza za hepatitis B, zatim, u slučaju pozitivnog zaključka, i za hepatitis D. Također, kvalitativno analiziranu reakciju treba provesti zajedno s drugim testovima krvi. Analize će pokazati potpunu sliku širenja virusa.

Iz rezultata ispitivanja bit će vidljiv ili negativan samo pozitivan test na hepatitis C, odnosno prisutnost ili odsutnost virusa. Ako je izlaz "otkriven", virus je i dalje aktivan. Oznaka "nije otkrivena" označava odsutnost virusa ili njegovu malu količinu. Uz ovaj pokazatelj treba imati na umu da je analitička osjetljivost dijagnostičkih sustava različita i da RNA hepatitis C još uvijek može biti u krvi, ali se ne očituje u analizi.

Posebno osjetljiva PCR metoda otkriva ultra hepatitis C čak iu oskudnim količinama. Upotrijebljena je studija fluorescentne hibridizacije koja je mnogo puta veća od standardnih PCR sustava. Metoda se koristi u nekoliko slučajeva:

  • sumnjive skrivene oblike hepatitisa C;
  • PCR dijagnostika nije potvrdila patogen, ali postoje antitijela;
  • u slučaju oporavka;
  • za otkrivanje rane infekcije.
Natrag na sadržaj

Analiza dekodiranja

PCR dekodiranje HCV-a utječe na konačnu odluku kada se postavlja dijagnoza, osobito ultrametod metodom. Glavni nedostatak ove studije je strogo pridržavanje sterilnim uvjetima za uzorak i materijale. Blago odstupanje ponekad pokazuje netočne analitičke zaključke, komplicira dijagnozu i naknadno liječenje. Analiza PCR-a za određivanje hepatitis RNA ne pokazuje uvijek pouzdanu sliku bolesti, ponekad su dopuštene netočnosti iu oba smjera.

Dijagnosticiranje virusa hepatitisa preporuča se za sveobuhvatno ispitivanje.

Norma pokazatelja

Izostanak JgM protutijela na virusni hepatitis C u rezultatima ispitivanja smatra se normom u analizi lančane reakcije polimeraze. Istodobno, rezultati serološke analize ukazuju na prisutnost protutijela na virus C i to je također unutar normalnih granica. Kvalitativna definicija ne pokazuje intenzitet bolesti, on samo otkriva uzročnika hepatitisa C u RNA. Ova se analiza ponavlja nakon tretmana kako bi se potvrdio stvarni oporavak.

odstupanja

Ako su prisutna JgM protutijela na HCV RNA, to ukazuje na razvoj infekcije. Bolest se istovremeno odvija akutno ili kronično, manifestira se u različitim fazama. Ako se zabilježi smanjenje broja antitijela, analiza će pokazati da su rezultati liječenja postignuti tijekom oporavka. U dijagnostici postoje iznimno rijetki slučajevi lažno pozitivnih nalaza. Oni se nalaze u žena tijekom trudnoće i kod osoba s drugim zaraznim bolestima.

PCR analiza za hepatitis C

Za dijagnozu "kroničnog virusnog hepatitisa C (CVHS)" potrebno je sveobuhvatno ispitivanje osobe, što uključuje kliničke, laboratorijske i instrumentalne studije. S točke gledišta dijagnoze za ispravnu dijagnozu važno je PCR metoda - lančana reakcija polimeraze.

Što ova analiza pokazuje i zašto je potrebna?

Ova laboratorijska metoda otkriva RNA virusa hepatitisa C u ljudskoj krvi. Zajedno s enzimski imunosorbentnim testom (ELISA) za antitijela na virus, PCR se koristi za postavljanje dijagnoze CVHC i njenog patogenog genotipa. Ovo je jedno od najnovijih metoda laboratorijske dijagnostike. Njegova pouzdanost u CVHS-u prelazi 97%, što se smatra vrlo dobrim pokazateljem za istraživanje.

Postoje tri PCR testa krvi za CVHS: kvalitativna, kvantitativna i genotipizacija virusa. Prva studija (kvalitativna analiza) virusa otkriva je u krvi i stoga se koristi samo za dijagnozu.

Druga (kvantitativna) studija određuje stupanj virusnog opterećenja na tijelu, stoga se koristi za praćenje učinkovitosti terapije.

Treći PCR (genotipizacija) pojašnjava dijagnozu, utvrđuje genotip virusa, što je vrlo važno za postavljanje ispravnog antivirusnog liječenja.

Suština tehnike lančane reakcije polimeraze je uporaba enzima koji umnožavaju genetski materijal patogena u biomaterijal. U procesu takve replikacije, epruveta s krvi se zagrijava nekoliko puta i ohladi na temperaturu potrebnu za ubrzavanje enzimske reakcije. Kao rezultat ovih manipulacija, količina virusnog genoma povećava se mnogo puta, dopuštajući da se otkrije čak i uz minimalnu količinu.

PCR dijagnostika ima mnoge prednosti u odnosu na druge laboratorijske testove:

  • visoka osjetljivost - 97-98%;
  • zajamčena analitička specifičnost (otkriva točno onaj patogen koji želite pronaći, a ne njegov srodni soj);
  • brzina provođenja (potrebno je više od 2 dana za dobivanje zaključka).

Tri tipa PCR testova

Visokokvalitetna PCR analiza dodijeljena je svim pacijentima kod kojih je ELISA analiza otkrila protutijela na HVGS virus. Nakon provedbe PCR-a visoke kvalitete, mogu se dobiti dvije opcije odgovora: "RNA je detektirana" ili "RNA nije detektirana". Da bi se otkrila minimalna količina virusa u krvi, potrebni su testni sustavi s osjetljivošću od najmanje 50 IU / ml. Ako je koncentracija virusa u krvi pacijenta manja nego što dijagnostika može odrediti, rezultat studije može biti lažno negativan. Kako bi se izbjegla takva dijagnostička pogreška, laboratoriji koji izvode PCR dijagnostiku trebaju imati visoko osjetljive testne sustave. U laboratoriju "Invitro", na primjer, koriste se testovi osjetljivosti od 15 IU / ml. Laboratorijski radnici su dužni pružiti informacije o osjetljivosti testova na pacijente i liječnike na njihov prvi zahtjev.

Kvantitativna analiza PCR-a određuje stupanj viremije, odnosno koncentraciju patogena u krvi, virusno opterećenje. Rezultat ove studije, za razliku od visokokvalitetnog PCR-a, izražen je brojevima, na primjer 2 × 10 x 6 IU / ml, što znači 2 milijuna međunarodnih jedinica u 1 ml krvi. Neki laboratoriji koriste drugi pokazatelj - broj kopija / ml. Ova dva pokazatelja se lako pretvaraju: 1 međunarodna jedinica jednaka je 4 kopije RNA. Dakle, 2 x 10 x 6 IU / ml će značiti da 8 x 10 x 6 kopija virusne RNA u 1 ml, tj. 8 milijuna kopija u 1 ml krvi.

Genotipizacija je definicija jednog od šest genotipova virusa. Klinička slika, brzina razvoja komplikacija jetre i prognoza za budući život pacijenta ovise o genotipu uzročnika. Genotip virusa je vrlo važan već u fazi dijagnoze, budući da kombinacija lijekova i trajanje terapijskog tijeka koji se dodjeljuje pacijentu ovisi o njegovoj točnoj određenosti.

Međutim, čak i ovo naizgled "savršeno" laboratorijsko istraživanje ima svoje nedostatke:

  • studija replicira genetski materijal svih patogena, čak i neživih, koji mogu iskriviti rezultat. Stoga, kako bi se pratila učinkovitost uz pomoć PCR-a, re-analiza se provodi najranije 2 mjeseca nakon prethodnog, tako da mrtvi virusi mogu „napustiti“ organizam pacijenta;
  • dio virusnog genoma, koji se određuje pomoću testnih sustava, teoretski može biti prisutan u drugim virusima ili mikroorganizmima, tako da postoji mogućnost lažno pozitivnog odgovora;
  • virusi brzo mutiraju. Ponekad je brzina i opseg mutacije virusa toliko visok da testni sustav prestane hvatati njihov genom. Kao rezultat, moguć je lažno negativan rezultat.

Da bi se razriješili ovi nedostaci, proizvođači laboratorijskih testnih sustava za PCR dijagnostiku stalno provode svoje testove, uključujući unakrsne reakcije i osjetljivost na određeni genotip virusa.

Kako uzeti PCR test za hepatitis C?

Da bi zaključak PCR ispitivanja bio pouzdan, potrebno je strogo slijediti pravila za pripremu:

  • studija se provodi na prazan želudac (glukoza, masti, minerali koji ulaze u krv iz hrane, mogu utjecati na brzinu i kvalitetu enzimske reakcije);
  • jaz između posljednjeg obroka i uzorkovanja krvi za analizu trebao bi biti najmanje 8 sati;
  • uoči istraživanja zabranjeno je uzimati alkohol i konzumirati masnu hranu, čije je razdoblje uklanjanja dugotrajno;
  • dan prije odlaska u laboratorij treba izbjegavati jak fizički i emocionalni stres;
  • do trenutka uzimanja uzorka krvi nije preporučljivo pušiti.

Kako bi se izbjeglo pojavljivanje lažnih zaključaka, navodni pacijent mora doći u laboratorij nešto ranije od uzimanja krvi. Potrebno je 15-20 minuta da osoba uhvati dah, smiri se. Adrenalin, koji je prisutan u krvi nakon kratke šetnje, može utjecati na rezultat pregleda.

Ako pacijent koji je upućen na analizu uzima lijekove, trebao bi o tome obavijestiti liječnika. Moguće je da će neke od njih morati neko vrijeme biti odbijene (ako je moguće).

Rezultat analize PCR-a za hepatitis C

Dekodiranje rezultata uključeno je u laboratorijskog liječnika laboratorija koji je proveo analizu. Dekodiranje je određivanje odstupanja rezultata dobivenog iz norme. Stopu pokazatelja uspostavlja izravno proizvođač testnog sustava, koji koristi laboratorij za dijagnostiku. Stoga ne iznenađuje da je u nekim laboratorijima virusno opterećenje određeno u IU / ml, au drugima u kopijama / ml.

Nakon što je dobio zaključak, potrebno ga je moći ispravno protumačiti. Liječenje rezultata istraživanja treba provoditi liječnik pacijenta s hepatitisom C. Samo nakon objektivnog, instrumentalnog i laboratorijskog pregleda pacijenta, liječnik može dobiti dovoljnu količinu podataka za ispravnu interpretaciju dobivenih rezultata PCR-a.

Evaluacija kvalitativne analize, u pravilu, ne uzrokuje poteškoće, čak ni u bolesnika. Rezultat može biti samo jedan: "otkriven" ili "nije otkriven". U ovom slučaju, druga je norma.

Pokazatelji kvantitativne analize je teže interpretirati. Prikazuje stupanj virusnog opterećenja pacijenta. Čak i među hepatolozima nema konsenzusa o tome kako liječiti otkrivenu viremiju. Većina liječnika je sklona vjerovati da bi trebalo razmotriti veliko opterećenje veće od 8 × 10 x 5 IU / ml. Opterećenje veće od 1 x 10 x 7 IU / ml smatra se vrlo visokim, dok je nisko opterećenje manje od 4 × 10 x 5 IU / ml.

Stupanj virusnog opterećenja ukazuje na virulenciju (agresivnost) virusa: što je veća količina u krvi, to se brže mogu razviti komplikacije jetre. Visoka koncentracija virusa u krvi trudnice povećava vjerojatnost njegovog prodiranja kroz hemato-posteljnu barijeru do fetusa. Viremija također utječe na učinkovitost liječenja: s malim brojem, učinkovitost terapije je veća nego kod visokih.

Da bi bili sigurni u točnost analize PCR-a za hepatitis C, potrebno je dati prednost samo onim laboratorijima koji su dobro dokazani. Politika određivanja cijena u ovom slučaju ne bi trebala imati primarnu ulogu.

Primjena PCR dijagnostike

Lančana reakcija polimeraze (PCR) u molekularnoj biologiji je eksperimentalna metoda za otkrivanje virusa. Omogućuje značajno povećanje koncentracije pojedinih fragmenata nukleinskih kiselina (DNA) u uzorcima biološkog materijala, što ih čini mogućim za određivanje (prepoznavanje) i brojanje.

Analiza se izvodi na sljedeći način. Genetski materijal (uzorak krvi), koji potencijalno može uključiti željeni gen, uveden je u epruvetu. Tu su također postavljeni prajmeri - kemijski sintetizirani segmenti male duljine željenog gena.

DNA ili RNA polimeraza se također dodaje u posudu, ona je u stanju poravnati lanac nukleinske kiseline koji je potpuno identičan originalu. U rezultirajućem sastavu ubrizgava se i skup od četiri slobodna nukleotida - poseban građevinski materijal za RNA ili DNA, od kojih jedan sadrži radioaktivne fosforne čestice.

Dobivena smjesa se zagrijava na 95-96 ° C, zbog čega su tkane dvije DNK helike, koje se normalno isprepliću. Tada se lijek hladi, kada se prajmeri sami vežu na željenu regiju virusnog genoma, sprječavajući RNA (ili DNA) da ponovno formira dvostruku spiralu.

U procesu hlađenja, polimeraza traži slobodni nukleotidni lanac. Za funkcioniranje ovog enzima je potreban jedan lanac nukleotida. Budući da polimeraza klizi duž lanca DNA (poput prstena na užetu), ne može raditi na dvostrukoj spirali.

Nakon toga se provodi ponovljeni ciklus zagrijavanja, zbog čega se razdvajaju lanci nukleotida. Na svakom od tih ciklusa PCR-a, količina u uzorku željenog gena hepatitisa eksponencijalno raste, a ostatak genetskog materijala se proizvodi (raste) linearno.

Nakon pročišćavanja otopine iz nukleotidnih ostataka i odvajanja elektroforezom DNA lanaca parametrom molekulske mase, lako se može odrediti postoji li željeni gen u ispitivanom uzorku ili ne.

Prednosti PCR-a

Laboratorijsko testiranje pomoću PCR-a omogućuje dobivanje još više informacija od prisutnosti virusne RNA. Određivanjem parametra razine radioaktivnog zračenja moguće je utvrditi koliko je genetskog materijala izvorno sadržano u ispitivanom uzorku. U slučaju hepatitisa odredite pokazatelj razine virusnog opterećenja.

Još jedna prednost ove metode je vrlo visok stupanj osjetljivosti reakcije CR. On je mnogo viši od klasičnih metoda otkrivanja virusa. U idealnom slučaju, da bi se odredio željeni gen, za PCR je dovoljan samo jedan virus u uzorku.

Osim toga, PCR je potpuno specifičan. Njegovi prajmeri su dizajnirani na takav način da potpuno odgovaraju jedinstvenom području željenih gena koje nemaju druge sekvence. Kao što su otisci prstiju jedinstveni, svaki gen ima jedinstvene sekvence nukleotida.

Kvalitativna analiza PCR-a

Kvalitativna analiza otkriva samo prisutnost virusa u krvi. Ovaj test treba provesti za sve bolesnike kod kojih su u krvi pronađena protutijela za hepatitis C. To može rezultirati samo jednom od dvije vrijednosti: "otkriveno" ili "nije otkriveno". Kod zdrave osobe normu (referentnu vrijednost) treba „ne otkriti“.

Posebno tumačenje takvih rezultata kvalitativnog istraživanja:

  • Rezultat je "otkriven". To znači da je u analiziranom uzorku uzetog biološkog materijala pronađen fragment RNK koji je specifičan za virus hepatitisa C, stoga postoji činjenica da je pacijent zaražen virusom hepatitisa C. Ako se rezultat visokokvalitetnog PCR "otkrije", to pokazuje da se virus multiplicira. i u ovom trenutku zarazi nove stanice jetre u tijelu.
  • Rezultat nije "otkriven". Takva presuda ukazuje da u analiziranom uzorku dobivenog biološkog materijala u ovom laboratoriju nije pronađen niti jedan fragment RNK koji je specifičan za virus hepatitisa C.

U akutnoj fazi RNA virusa hepatitisa C takve kvalitativne studije PCR metodom mogu se otkriti već nakon 1-2 tjedna neposredno nakon infekcije tijela, dakle puno prije pojave antitijela na hepatitis.

Nepouzdani rezultati ispitivanja ove studije mogu se dobiti:

  • kontaminirani biomaterijal;
  • prisutnost heparina u krvi pacijenta;
  • prisutnost u uzorku kemijskih ili proteinskih tvari (inhibitora) koje utječu na različite komponente PCR-a.

Da bi se provela kvalitativna analiza PCR-a, nije potrebna posebna priprema bolesnika za studiju. Materijal koji se koristi je venska krv.

Evaluacija rezultata

Visokokvalitetni PCR testovi imaju određeni stupanj osjetljivosti, a ovisno o točnosti istraživanja i razini opreme u laboratoriju može varirati od 10 do 500 IU / ml.

To znači da ako je virus u uzorku krvi prisutan u vrlo niskoj koncentraciji (manje od vrijednosti osjetljivosti praga u ovom laboratoriju), tada se rezultat za bolesnika može "ne otkriti". Zbog toga, kada se provodi kvalitativna analiza PCR-a s niskom razinom viremije (niska koncentracija virusa), na primjer, za pacijente koji prolaze kroz antivirusnu terapiju, vrlo je važno znati prag osjetljivosti ovog dijagnostičkog sustava.

Varijante dijagnostičkih sustava

Za kontrolu virološkog odgovora preporuča se primjena dijagnostičkih sustava s pragom osjetljivosti od najmanje 50 IU / ml kod provođenja antivirusnog liječenja. Ti su kriteriji ispunjeni, na primjer, analizatorima Cobas Ampicolor HCV-testa (točno do 50 IU / ml), kao i RealBest HCV RNA (s osjetljivošću od 15 IU / ml).

Prema preporukama Svjetske zdravstvene organizacije, da bi se uspostavila konačna dijagnoza hepatitisa C, potrebno je temeljiti samo na temelju trostruke detekcije RNA C virusa u uzorcima seruma pacijenta, u nedostatku drugih tipova markera hepatitisa.

Osim PCR metoda, TMA test (metoda transkripcijske amplifikacije) također se koristi za otkrivanje HCV RNA u bolesnika. Ima najbolji prag osjetljivosti (5-10 IU / ml), ali u našoj zemlji takva metoda ispitivanja još nije vrlo česta.

Raspon otkrivenih modifikacija virusa

Takvo kvalitativno određivanje u serumu RNA virusa hepatitisa C omogućuje određivanje nekoliko genotipova ovog virusa. Trenutno, znanost poznaje više od šest genotipova ovog virusa, kao i oko 10 podtipova ove bolesti.

U našoj zemlji, uobičajeni virusi 1, 2, 3 genotipova. Laboratoriji mogu detektirati sljedeće genotipove: 1a i 1b, 2a, 2b i 2c, kao i 3, 4, 5a i 6, bez obzira na podtipove. Za sve modifikacije virusa specifičnost detekcije je 100%.

PCR kvantitativna analiza

Kvantitativnim PCR testom utvrđuje se razina koncentracije virusa hepatitisa u uzorcima krvi (virusno opterećenje). Ovaj test za viremiju (koncentracija virusa) omogućuje vam da odredite broj jedinica određenog genetskog materijala (sama virusna RNA), koja se detektira u određenoj količini. U tom slučaju odredite njegovu koncentraciju u 1 ml, što odgovara 1 cu. cm.

Kvantitativni parametri analize izraženi su u brojkama, pri čemu se kao mjerne jedinice koriste međunarodne jedinice (IU) po mililitru (ml), označene kao IU / ml. Sada se u nekim laboratorijima količina virusa može odrediti u drugim jedinicama: broj primjeraka po ml označen je kao kopija / ml.

  • Datumi Za hepatitis C, takva kvantitativna analiza PCR-a vrši se neposredno prije početka terapije. Zatim na 1., 4., 12. i 24. tjednu. Vrednovanje 12. tjedna je indikativno, što omogućuje utvrđivanje učinkovitosti terapije.
  • Priprema za analizu. Da bi se provela kvantitativna analiza PCR-a, nije potrebna posebna priprema bolesnika za studiju. Pola sata prije uzorkovanja ne smije se pušiti. Venska krv se koristi kao laboratorijski materijal.

Evaluacija rezultata

Za različite laboratorijske sustave ispitivanja postoje različiti faktori konverzije za ovaj pokazatelj u IU / ml. U prosjeku uzimaju parametar konverzije, u kojem 4 kopije / ml = 1 IU / ml. To je, na primjer, ako laboratorij daje rezultate PCR analize 2,4 x 10 6 kopija / ml, tada taj parametar treba podijeliti na 4 i dobiti ćemo 6 x 105 IU / ml.

Opterećenje od 800.000 IU / ml smatra se visokim, što približno odgovara 3,000,000 kopija / ml. Niska viremija, prema nekim autorima, odgovara parametrima kvantitativne PCR ispod 400.000 IU / ml.

Kao rezultat kvantitativnog testa, konačni rezultati mogu biti dostavljeni ne u obliku digitalne vrijednosti, već: "ispod mjernog područja" ili "nisu otkriveni".

  • Procjena: "ispod mjernog raspona." To pokazuje da kvantitativni test nije uspio otkriti virusnu RNA hepatitisa C, međutim, sam virus je prisutan u tijelu u vrlo niskim koncentracijama. O tome svjedoči dodatni test kvalitete, koji potvrđuje postojanje virusa.
  • Ocjena: nije otkrivena. Ovaj rezultat pokazuje da kvantitativni test nije pronađen u uzorku RNA virusa.

Parametar virusnog opterećenja, prije svega, određuje stupanj infektivnosti bolesti, razinu "infektivnosti" pacijenta. Što je veća koncentracija virusa u pacijentu, veća je vjerojatnost da se ona prenese na druge ljude. Primjerice, tijekom spolnog odnosa s bolesnom osobom ili vertikalno. Ovaj kvantitativni pokazatelj također pomaže u određivanju djelotvornosti liječenja pacijenta.

Provođenje kvantitativne analize CCP-a važno je za antivirusnu terapiju, procjenu njenog uspjeha i planiranje trajanja tečaja. Dakle, s brzim odgovorom tijela na liječenje i niskim stupnjem viremije, trajanje terapije može se smanjiti.

Ako se kvantitativni parametar PCR polako smanji, antivirusnu terapiju treba produžiti ili modificirati. Ako je razina virusnog opterećenja niska, onda je to povoljan čimbenik u terapiji, a ako je povišen, tada je metoda koja se koristi neučinkovita i lijekovi ili metode njihove primjene trebaju se promijeniti.

Kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C: negativan, pozitivan, transkript

Hepatitis C je virusna bolest jetre uzrokovana flavivirusom HCV (iz engleskog virusa hepatitisa C), čija struktura sadrži molekulu ribonukleinske kiseline (RNA). RNA nosi genetski kod virusa. Njegova prisutnost omogućuje analizu PCR-a za hepatitis C.

Opasnost od HCV-a za osobu leži u činjenici da takozvani serološki prozor (vrijeme između infekcije i pojava reakcije imunološkog sustava) može biti prilično dugo - od nekoliko tjedana do šest mjeseci.

Ne otkriva infekciju i započinje liječenje na vrijeme.

Ovisno o individualnim karakteristikama organizma, nositelj HCV se može manifestirati u akutnom obliku, kao i kronična bolest koja će zahtijevati dugo i skupo liječenje. U otkrivanju antitijela na HCV, provodi se niz laboratorijskih testova, uključujući PCR za hepatitis C. Ovaj test se provodi svim osobama u kojima su pronađena protutijela krvi na HCV.

Što je PCR analiza?

Laboratorijska analiza PCR-a za hepatitis C - istraživanje biološkog materijala za utvrđivanje prisutnosti flavavirusa.

Lančana reakcija polimeraze (kako skraćuje skraćenica) pokazuje kvantitativnu vrijednost virusnog oštećenja organizma, njegove kvalitativne karakteristike, kao i genotip virusa koji sadrži RNA.

Na temelju njih, kao i na temelju dodatnih analiza, određuje se način i trajanje terapije, kao i epidemiološki faktor (stupanj rizika prijenosa na drugog nositelja).

Što je analiza RNA hepatitisa C?

Hepatitis C PCR se također naziva RNA analiza (HCV RNA), jer Flavavirus sadrži česticu RNA s veličinom viriona od 30-60 nm. Jedna od značajki ovog mikroorganizma je visoka sklonost za mutacije.

Svaka od podvrsta (genotipova) virusa ima različitu otpornost, što uzrokuje različite metode liječenja i prirodu daljnje prognoze za pacijenta.

Biološki materijal (venska krv) daje se na prazan želudac i, u pravilu, testira se Real-Time PCR metodom (visoko osjetljiva dijagnostika u stvarnom vremenu s nižom granicom detekcije od 15 IU / ml pomoću zatvorenih automatskih sustava).

Postoje i drugi testovi, na primjer COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU / ml. Za bilo koji laboratorijski test važan je prag osjetljivosti, tj. sposobnost reagensa da detektira minimalnu koncentraciju virusa u biološkom materijalu.

Vrste analiza za hepatitis C PCR-om

PCR hepatitisa C uključuje tri važne komponente:

  • kvalitativna analiza;
  • kvantitativna analiza;
  • genotipizacija.

Ovi testovi mogu odrediti prirodu viremije, kao i genetske značajke patogena. Ovisno o osjetljivosti dijagnostičkog sustava, studija se provodi jednom, a ponekad se drugi test provodi s osjetljivijim reagensom kako bi se potvrdili ili poboljšali rezultati.

Visokokvalitetni PCR hepatitis C

PCR analiza hepatitisa C kvalitativna je drugo uobičajeno ime za analizu lančane reakcije polimeraze. Standardna osjetljivost testa, koja omogućuje otkrivanje prisutnosti virusnih lezija, je u rasponu od 10-500 IU / ml.

Negativna PCR analiza za hepatitis C pokazuje da je koncentracija virusa u krvi pacijenta ispod praga osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

Ako PCR visoke kvalitete daje odgovor "nije otkriven", onda je za naknadno liječenje važno saznati prag osjetljivosti reagensa.

Proteinske frakcije flavavirusa pojavljuju se mnogo kasnije.

Kvantitativni PCR za hepatitis C

PCR hepatitis C kvantitativan je pokazatelj virusnog opterećenja, koji odražava razinu koncentracije RNA flavavirusa u tijelu. Ovo je pokazatelj koji pokazuje koliko je fragmenata virusne RNA sadržano po kubičnom centimetru krvi. Rezultati PCR-a hepatitis C RNA u kvantitativnom testu u konvencionalnom sustavu naznačeni su u međunarodnim jedinicama po mililitru (IU / ml) i mogu se zabilježiti na različite načine, na primjer 1,7 milijuna ili 1,700 000 IU / ml.

Kvantitativna PCR dijagnostika hepatitisa C propisana je pacijentima prije početka antivirusne terapije, te u 12. tjednu liječenja, kako bi se ocijenili rezultati odabrane metode liječenja HCV-a. Virusno opterećenje omogućuje određivanje tri važna pokazatelja bolesti:

  • infektivnost, tj. stupanj rizika prijenosa virusa s jednog nositelja na drugi (što je veća koncentracija RNA virusa flavavirusa, veća je vjerojatnost zaraze druge osobe, na primjer, putem seksualnog kontakta);
  • metoda i učinkovitost liječenja;
  • trajanje i prognoza antivirusne terapije (što je veći virusni teret, dulje traje liječenje).

Kvantitativna PCR dijagnostika hepatitisa C ovisi o vrsti laboratorijskog testa i pragu njegove osjetljivosti. Donja granica norme smatra se pokazateljem do 600.000 IU / ml, prosječna vrijednost je unutar 600.000 - 700.000 IU / ml. Rezultati od 800.000 IU / ml i više smatraju se visokim razinama virusa koji sadrži RNA.

genotipizacija

Zbog visoke mutacijske aktivnosti HCV u prirodi, pri testiranju je važno identificirati koji je genotip virusa u krvi pacijenta. Ukupno je na planetu zabilježeno 11 genotipova virusa hepatitisa C koji uključuju mnoge podvrste (podtipove). Na teritoriju Ruske Federacije podijeljeno je 1,2 i 3.

Hepatitis C PCR RNA zajedno s genotipizacijom je vrlo važna komponenta analize, budući da dopušta liječniku da odredi otpornost (otpornost) virusa, odabere odgovarajuće lijekove i odredi tijek liječenja.

Genotipizacija također omogućuje neizravno određivanje stanja jetre. Na primjer, genotip HCV-a često je praćen steatozom, u kojoj se masnoća nakuplja u stanicama organa.

Analiza krvi za PCR za hepatitis C trebala bi proizvesti brojku koja određuje genotip. Laboratorijski odgovori mogu reći "nije tipiziran" - a to znači da je virus u ljudskoj krvi koji nije detektiran testnim sustavom. To može značiti da genotip nije tipičan za određeno geografsko područje. U tom slučaju ponovite analizu s većom osjetljivošću dijagnostičkog sustava.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

Test za kvantitativnu dekriptu hepatitisa C PCR može se temeljiti na gore navedenim podacima. Prilikom dobivanja rezultata laboratorijskih ispitivanja obično se upisuju sljedeći podaci:

  • "Pronađen" / "nije pronađen" (PCR visoke kvalitete za hepatitis C);
  • broj frakcija koje sadrže RNA, na primjer 831.680 ME / ml (kvantitativna PCR analiza);
  • brojka koja određuje genotip HCV, na primjer - 1, 2, 3, 4;
  • Ime testa najčešće je u stvarnom vremenu.

Najvažnija stvar kod dešifriranja PCR analize za hepatitis C je druga stavka, koja pokazuje virusno opterećenje, koje određuje prognozu, metodu i trajanje liječenja.

Ako je PCR test za hepatitis C negativan, a ELISA pozitivna - što to znači?

Za dešifriranje laboratorijskih testova važno je kontaktirati hepatologa ili specijaliste za infektivne bolesti koji će objasniti podatke dobivene u skladu s vrstom dijagnostičkog sustava i njegovim pragom osjetljivosti. U medicinskoj praksi postoji mnogo podataka o krvnim testovima koji mogu zavesti osobu bez medicinskog obrazovanja.

Na primjer, ako je test za hepatitis C PCR negativan i ELISA je pozitivna, to može značiti da nema HCV u krvi pacijenta u ovom trenutku, ali je prethodno pretrpio akutni oblik hepatitisa C. t postoje antitijela u krvi koja su nastala nakon invazije virusa u prošlosti. Ali u suvremenoj medicinskoj praksi ELISA analiza se smatra nedovoljno pouzdanom i često daje netipične rezultate, pa je liječnici koriste kao primarni skrining. Prilikom dijagnosticiranja bolesti, stručnjaci se rukovode upravo PCR testovima.

Korisni videozapis

Sljedeći videozapis na vrlo detaljan i zanimljiv način objašnjava suštinu PCR metode, kako se provodi analiza:

zaključak

Za analizu PCR-a hepatitisa C obično se uzima venska krv. Najčešće postoji dvostruki unos biološkog materijala - za ELISA, i izravno za PCR test. Za ispravne rezultate ispitivanja potrebna je usklađenost s osnovnim pravilima za laboratorijsko skupljanje biološkog materijala:

  • krv za analizu daje se u prvoj polovici dana na prazan želudac;
  • između obroka i prikupljanja krvi treba trajati najmanje 8 sati;
  • Alkohol i pržena hrana također treba isključiti prije testa.
  • tijekom dana prije davanja krvi potrebno je izbjegavati visoke fizičke napore.

Rezultati testa krvi obično su spremni sljedećeg dana.